逆转录聚合酶链反应,间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验检测严重急性呼吸综合征相关冠状病毒感染的探讨.pdfVIP

维普资讯 936 ShanghaiMedJ，2004，Vol27，No12 · 临床 研 究 · 逆转录聚合酶链反应、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验 检测严重急性呼吸综合征相关冠状病毒感染的探讨 周志统 蒋伟伦 袁正宏 沈芳 瞿涤 顾仕民 傅龙亭 张仁芳 严重急性呼吸综合征(SARS)是 2002年底首先在我 原理为双抗原夹心法，即在酵母菌表达的 SARSCovN蛋 国南部地区爆发流行的一种新型传染病 ，2003年 4月经世 白包被的微孔板上 ，每孔加 100tA l：50稀释的血清标本， 界卫生组织(WHO)组织的国际多中心合作网络研究确定 ， 每板同时设置 2份阳性对照、2份阴性对照和 l孔空白对 该病由新发现的SARS相关冠状病毒 (SARsC0V)所致。 照。37℃温育2h，洗涤 5次，每：fLD~人 100 ISARSCovN D 目前 虽 已初步建立 了包括逆转录聚合酶链反应 (RT— 蛋白酶的结合物，37℃孵育 1h，洗涤 5次，加显色剂 ，置 PCR)、免疫荧光试验 (IFA)和酶联免疫吸附试验 (ELISA) 37℃显色 10rain，终止反应，应用酶标检测仪读取吸光度 D 的特异性检测方法 ，对SARS的诊断起到重要作用，但均存 (A)值。阳性判断标准：样品(S)A值 ／临界值 (C0)≥1为 在一定的局限性，尚不能充分满足早期诊断和防治的需要。 阳性。其中C0=阴性对照平均 A值 ×2．1，如阴性对照平 C 为此 ，wH0建议对 SARS的诊断仍以流行病学和临床的发 均 A值0．05按 0．05计算。 现为主，并积极推动实验室诊断水平的进一步提高。2003 二 、结果 年 3～6月上海市传染病医院，承担了上海市 SARS临床诊 1．RT—PCR检测SARS-CoVRNA：5l例 l02份各类标 断和疑似病例的收治，并对临床诊断SARS病例、部分疑似 D 本的RT．PCR检测结果见表 1。在临床诊断为 SARS的6 病例和密切接触者的各类标本 先后进行 了相应 的 例中，检出SARS-CoVRNA阳性5例 ，其中血清单独阳性3 RT—PCR、IFA和ELISA检测，现报道如下。 D 例，咽漱液单独阳性 1例，血清咽漱液同时阳性 l例 (4例 一 、 材料与方法 血清阳性标本的时间分别为发病 3、6、9和 10d；2例咽漱 C 1．RT．PCR检测 SARS-CoV RNA：共检测 51例 102 液阳性标本的时间分别为发病6和 l2d)，另 1例临床诊断 份血清、咽拭 、咽漱液和尿液标本。其中包括6例临床诊断 病例和其他检测对象的各类标本检测结果均为阴性。 为SARS病例的 14份血清、5份咽漱液和 8份尿液 ；32例 表 1 51例 102份各类标本的RT．PCR检测结果 疑似SARS病例的37份血清、19份咽拭和 l