毕赤酵母表达外源基因存在的问题和对策.pdfVIP

畜牧与兽医2007年第39卷第2期 ·57· 毕赤酵母表达外源基因存在的问题与对策 丁 镌1，宋跃芬1，袁野2，刘 娣1’3+ (1．东北农业大学动物科技学院，黑龙江哈尔滨150030； 2．中国刑警学院警犬技术系，辽宁沈阳 110034；3．黑龙江省农科院，黑龙江哈尔滨150086) 摘要：本文简述了毕赤氏酵母作为外源蛋白表达系统所具有的优越性，以及常规的试验流程，论述了该系统在表达外源蛋白时存在的缺陷并针对 这些缺陷提出了相应的对策。 关键词：毕赤酵母；外源蛋白；表达 中图分类号：Q949．326．1文献标识码：A 文章编号：0529-5130(2007)02-0057—03 随着分子生物学研究进入到后基因组时代，人们的注意力 是分泌型表达载体，在多克隆位点的前面，外源基因的5’端和 越来越多地转移到蛋白质的结构和功能方面，通过基因工程技 术生产功能蛋白愈来愈受到重视。酵母工程菌以其其他表达系 统无法比拟的优越性得到了广泛的应用。许多研究者利用重组 加工后由胞内转移至胞外，将成熟的蛋白质分泌到细胞外。 DNA技术、克隆技术及酵母表达系统将外源基因在酵母中进 酵母表达系统的载体主要分为附加型和整合型。附加型载 行了高效表达。毕赤酵母表达系统是在上世纪80年代末发展 体能够独立于酵母染色体外自主复制，但是不稳定，在传代过 起来的用以替代酿酒酵母表达系统的一种外源蛋白表达系统。 程中易丢失，影响重组菌的稳定性和表达量。所以，利用这种 自它问世以来就得到了广泛的应用。 质粒，必需筛选稳定的整合子。整合型载体，可以与酵母宿主 细胞的染色体基因组DNA发生同源重组，能够保证重组菌株 1宿主菌和表达载体 的稳定性，表达载体经过不同的酶切、线性化后，整合于酵母 巴氏毕赤酵母(P池施_p伽￡o廊)属子囊菌类，为单倍体。基因组中的AOⅪ或HIS4基因的位置，能在酵母中稳定存在。 ResearchLaborato— 表达株均来源于NRRL(NonhemRe萄onal ries)-Y11430。多数具有一个或多个营养缺陷型突变，以利于 表达载体转化时筛选。用于转化适合酵母宿主细胞的表达载体 发生‘11。 均为大肠杆菌和酵母菌的“穿梭”质粒，由来自酵母的部分 2毕赤酵母表达载体的优越性 基因序列和细菌的部分基因序列所组成。 所有的表达载体均包含以下几个基本组件：5’乙醇氧化酶 酵母作为一种最简单的单细胞真核生物，兼有原核生物和 基因(A0x1)启动子片段、多克隆位点(Mcs)、转录终止真核生物的某些优点。毕赤酵母生活史与酿酒酵母十分相似。 7 和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或zeocin)、3这使得毕赤酵母的发酵工程部分可与酿酒酵母相同，从而节省 了重新购置设备和进行新技术探索的巨额花费，这是用其他方 A0x1基因片段，还有部分pBR322质粒或coLEl序列。如果 法进行大规模商品化的外源蛋白生产所不能比拟的优势。现将 收稿日期：2005．12—15 毕赤酵母表达系统优点概括如下：①毕赤酵母更接近高等真核 基金项目：黑龙江省攻关资助项目(G肋lB04)。 细胞，不含内毒素和其他有害物质，使用安全；②同酿酒酵母 作者简介：丁镌(1979一)，女，硕士研究生。 一样，繁殖速度快，对