蝙蝠蛾拟青霉和冬虫夏草关系的分子系统学研究.pdfVIP

药学学报 A cta Pharm aceu tica Sin ica 2008, 43 (4) : 42 1 - 426 ·42 1 · 蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究 杨金玲 , 肖　薇 , 何惠霞 , 朱慧新 , 王淑芳 , 程克棣 , 朱 　平 (中国医学科学院、北京协和医学院 药物研究所 卫生部天然药物生物合成重点实验室 , 北京 100050) ( 摘要 : 以 5月和 6 月两个不 同时段采集 的分别产于青海省化隆县和 四川省康定县 的冬虫夏草 Cordy ceps ) ( s inens is 新鲜子实体为材料 ,采用分子生物学方法 , 以 rDNA ITS序列为分子标记 ,对蝙蝠蛾拟青霉 P aecilom y ces ) hep ia li 与冬虫夏草之间的关系进行了探讨 。以真菌通用引物 ITS1/ ITS4 分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵 虫基因组 DNA 进行 PCR 扩增 ,获得的片段克隆到 pMD 18T V ector上进行测序 ,结果表明 ,随机挑取的 46 个克隆与 ( ) 某些已在 GenB ank 中注册的中国被毛孢 H irsu tella s inens is 或冬虫夏草的 rDNA ITS序列的一致性均在 99% 以上 , 但与蝙蝠蛾拟青霉的 rDNA ITS序列的一致性约为 72% 。根据蝙蝠蛾拟青霉的 rDNA ITS序列设计了两对特异引 物 ,分别以不同产地及不同生长时期共 4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组 DNA 为模板 ,进行 PCR 及巢式 PCR 扩增 ,均得到了相应片段 ,该片段与蝙蝠蛾拟青霉的 rDNA ITS序列具有 100% 的一致性 。在 GenB ank 中注册号为 AB067740 的另一个标明为冬虫夏草的 rDNA ITS序列与注册号为 AJ309353 的中国被毛孢的 rDNA ITS序列一致性 仅为 873% ,但根据 AB067740序列设计特异引物 ,也从冬虫夏草基因组 DNA 中扩增到其相应序列 。研究结果表 明 ,在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外 ,还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌 。 关键词 : 蝙蝠蛾拟青霉 ; 冬虫夏草 ; 中国被毛孢 ; rDNA ITS区; 系统发育分析 中图分类号 : R915　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 0513 - 4870 (2008) 04 - 042 1 - 06 M olecular phylogenetic ana lysis of P aecilom yces h ep ia li and Cordyceps sin en sis YAN G J in ling, X IAO W ei, H E Hu ixia, ZHU Hu ixin , WAN G Shufang, CH EN G Ked i, ZHU P ing (Key L abora tory of B iosy n thes is of N a tu ra l P roducts, M in is try of H ea lth, In