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26 2 Vol126 No12
2009 4 JOURNAL OF BIOLOGY Apr, 2009
doiB1013969/j1 issn11008- 9632120091021004
,
(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237)
: 用表达谱芯片分析阿维 霉菌在发酵过程中转录组表达情况, 优化微生物转录组分析条件提取 RNA,进
行荧光探针的合成, 杂交,扫描对数据进行分析RNA 的提取要注意破壁方法的选择以及菌体量; 合成 cDNA 时,
RNA的加入量一般在 10L g左右; 当 cDNA 用逆转录的方法得到时, 用专门的纯化试剂盒要比传统的异丙醇纯化效
果好; 杂交温度对于合成基因来说一般在 42e ,对于比较长的PCR产物来说, 温度相比较要高点; 对于杂交时间来
说, 杂交 12h之上, 效果要明显比 6h 的好, 所以杂交时间一般选择 12h之上对芯片上的 197个合成基因进行分
析: 大约有 60个基因进行了表达,其中包括 18个双组分或激酶基因; 10个糖酵解或者三羧酸循环途径基因; 3个阿
维基因簇; 7个调节基因; 5个细胞分化或孢子形; 4 个运输或固定基因; 两个伴侣分子; 5个 RNA 聚合酶 R 因子; 3
个转录基因; 两个脂肪酸合成基因; 1个 RNA聚合酶 B亚基
: 基因芯片;探针; 杂交;信号
: Q753 : A : 1008- 9632( 2009) 02- 0004- 04
,
[2]
, , ,
,
1
, 111
, : AD25(
, ); : LB, pH 710; BufferTE: 10mM
Tris# Cl, 1mM EDTA pH 810 ; : 50~ 80mg/mL1;
Tm
RNAprotect Bacteria Reagent 2* 100mL (Cat1No176506);
mRNA RNeasy M ini Kit ( 50) (Cat1No174104); StrataScript 510
(), Multi2Temperature Reverse Transcriptase, 2000U, (:
mRNA 600098); StrataScript Multiple Temperature Reverse Tran2
cDNA , scriptase, (: 600105);QIAquickNucleotideRemovalKit
CY3() CY5(),
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