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核糖体小亚单位rRNA的二级结构 (a) E.coli 16S rRNA；（红色为高度保守区） (b) 酵母菌18S rRNA，它们都具有类似的40个臂环结构(图中1～40)， 其长度和位置往往非常保守；P、E分别代表仅在原核或真核细胞中 存在的rRNA的二级结构。(Darnell et al.，1990) L11-rRNA复合物的三维结构 (引自Porse et.al.,1999) RNAi的定义 RNA干扰（ RNA interference， RNAi）是由双链RNA分子（dsRNA）在mRNA水平关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因的表达，用特异的抗体几乎检测不到靶向基因表达的蛋白质。因此RNAi技术又被形象的称为基因敲低（knock－down）。RNAi是一种典型的转录后基因调控方法，又称转录后基因沉默（ posttranscriptional gene silencing PTGS）。 Dice into Small Pieces Assemble into RISC Complex Small Inhibiting RNA (siRNAs) Perfect Base-pairing to mRNA m7Gppp AAAAAA mRNA Cleavage and Destruction 21 dsRNA Dicer DNA CH3 CH3 Methylation of DNA Sequences Repression of Transcription 其它RNAi现象： PTGS 早在1990年，Jorgensen等将带有紫色色素的基因通过转基因导入矮牵牛花( Petunia)中 ,以期牵牛花的颜色更加艳丽。结果花的颜色非但没有加深,而且呈现出部分甚至全部的白色,这表明导入基因和植物中内源性基因的表达同时受抑。由于这种由于外源基因的导入而造成的抑制作用最初被确认是发生在转录后水平，所以被称为“转录后基因沉寂”（posttranscriptional gene silencing）或共抑制（cosuppression）。 Quelling 类似的现象还发生在真菌中，当把合成类胡萝卜素的基因转入红色面包霉中时，导致大约30％转染细胞本身基因的失活，这种现象称为“压制”（quelling）。 研究发现在植物、真菌、锥虫、涡虫、囊虫、线虫、果蝇、斑马鱼、老鼠早期胚胎等不同种属的生物体中都存在这一现象。 RNAi的机制 RNAi的几个重要成员： siRNA 导入生物体的dsRNA 在ATP 供能下被Dicer 复合物切割, 生成约22 个核苷酸( nu2cleotide , nt ) 的小干扰RNA ( small interfering RNA ,siRNA）。 siRNA的结构特征是： 双链，长度21－23nt； 具有5’末端磷酸基团和3’末端羟基； 双链两端具有两个突出的单链核甘酸。 　　 Dicer 导入生物体的dsRNA的降解过程需要不同的酶的参与，其中一种为dsRNA特异性核酸内切酶（dsRNA-specific endonuclease，Dicer）。Dicer是RNA酶Ⅲ家族中dsRNA特异性核酸内切酶，具有解旋活性。它的作用底物是长度200－500bp左右的dsRNA。Dicer切割dsRNA，产生21－23bp的siRNA片断。此酶对小于30bp的dsRNA和ssRNA均无活性。 siRNA dsRNA RdRp RNAi需要的另一种酶为RNA依赖性的RNA多聚酶（ RNA dependent RNA polymerase，RdRp）。此酶的作用是以siRNA为一种特殊的引物，以靶mRNA为模板，将mRNA通过聚合酶链式反应转变成为dsRNA，为Dicer提供底物。但用blast搜索果蝇和人的基因组序列，没有发现与已知RdRp同源的序列，所以有非RdRp依赖的RNAi学说。 RISC siRNA必须与RNA诱导沉默复合物（RNA－induced silencing complex， RISC ）结合才能具有切割靶mRNA的功能，siRNA是RISC的组成部分。RISC对靶mRNA的切割是以内切的方式进行的，而且切割仅发生在与siRNA同源的部分。 RNAi作用的简单模型 当dsRNA导入细胞后，被Dicer切割成21－23bp的siRNA，这一加工过程需要ATP提供能量。被切割成21－23bp的siRNA再与RISC结合并激活，siRNA在ATP提供的能量下解链，以它的