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乙肝检测综述 乙型病毒性肝炎（简称乙型肝炎）是由乙型肝炎病毒（简称乙肝病毒）引起的肝脏炎性损害，是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。乙肝检测在乙肝病毒感染的诊断及献血员筛选上均有重要意义：1．筛选供血员，通过检测 HBsAg ，筛选去除HBsAg 阳性的供血者，可使输血后乙肝发生率大幅度降低。2．可作为乙肝病人或携带者的特异性诊断。3．对乙肝病人预后和转归提供参考。一般认为急性乙肝患者，如HBsAg持续2个月以上者，约2/3病例可转为慢性肝炎。HBeAg阳性者病后发展成为慢性肝炎和肝硬化的可能性较大。4．研究乙肝的流行病学，了解各地人群对乙肝的感染情况。5．判断人群对乙肝的免疫水平，了解注射疫苗后抗体阳转与效价升高情况等。 随着科技的进步，免疫学和分子生物学等学科的不断纵深发展以及人们对乙肝病毒的认识，乙肝检测的方法手段也不断的更新，特异性和敏感性（检出率）也有明显提高,在60年代末引入了免疫沉淀试验，开创了对乙型肝炎病毒抗原抗体的检测。我们先后采用过琼脂免疫扩散，对流免疫电泳，免疫放射电泳自显影等方法，但其特异性及敏感性还较差。70年代初采用了一系列间接血凝试验(IHO)、免疫粘连血凝试验(IAHA)，乳胶凝集试验等，使检测的敏感性和特异性有所提高。Mancini（1965）提出单向免疫扩散技术（single immunodiffusion），此法是目前最常用的简易抗原定量技术单向免疫扩散试验是在凝胶中进行的沉淀反应将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度（最低浓度）约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺点是需1～2天才能看结果对流电泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果0.1mg。 由于免疫沉淀试验反向被动血凝（R-PHA）先将绵羊红血球以戊二醛固定，使其表面阴离子化，再经鞣酸或氯化铬（交联剂）理，使提纯的体吸附到醛化红血球表面致敏，此致敏血球与抗原相遇，发生特异性抗原抗体反应而使血球凝集，称为反向被动凝集（RPHA）。将含特异性抗体的待检血清与已知抗原先混合，使发生特异性抗原抗体反应而将抗原上的结合位点占据，此时加入抗体致敏血球就不能再与已知抗原起反应，因而不产生血凝，此法称为反向被动血凝抑制（RPHI）。反向被动血凝试验是用来检查抗原的，而反向被动血凝抑制试验则是用来检测抗体的。对流免疫电泳（CIEP）法和补体结合试验（CF）法比琼脂免疫扩散（ID）法要敏感20~100倍，可检测到每毫升中含有1微克以上的表面抗原颗粒。而反向被动试验（RPHA）又比对流免疫电泳和补体结合试验敏感10~100倍，可检出每毫升血清中所含的0.1微克以下的表面抗原。卫生部关于整顿血液制品生产管理的通知IＡ）或“酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）”。 二、80年代—90年代 我国于1983年建立分泌抗HBc IgM及IgG3的单克隆抗体的两个杂交瘤细胞系［12］。随后相继建立了分泌抗HBs、抗HBe、抗前S2及抗HAV等单克隆抗体杂交瘤细胞株。这些都迅速运用于多种检测方法和制备试剂盒的研究，显著地提高了检测水平。1994年研制了HBV前S2(HBV PreS2)基因工程单链抗体(ScFv)［14］。1995年又采用噬菌体抗体库技术，筛选到抗HBs单抗［15］。双功能抗体检测等新技术的研究也初见端倪。随着单克隆抗体、人工合成多肽及基因工程表达抗原、各种标记技术的出现，一系列超微量免疫学检测的研究迅速发展。固相放射免疫测定(SPRIA)及ELISA试验广泛应用于的检测，敏感度达到ng～fg/ml水平。放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法，用于定量测定受检标本中的抗原。最初建立的方法模式是以核素标记的抗原与受检标本中抗原竞争的测定模式本法的灵敏度高达ng甚至pg水平测定的准确性良好，特异性强、精密度高、有试剂盒供应，而且仪器设备并不昂贵，在医学检验中应用极为广泛，但由于核素的放射