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牙本质特异性蛋白与生物矿化 生 物 矿 化 Biomineralization 机体矿化组织在生物调控下由特殊细胞分泌有机基质，基质中蛋白质诱导钙、磷离子在基质上并按特定空间结构和时间顺序形成晶体 并生长，这个过程称“生物矿化”。 生物调控——基因调控、细胞因子介导 牙 本 质 磷 蛋 白 Dentin Phosphoprotein, DPP Dentin Phosphophoryn, DPP DPP的发现和定义 Veis和Penny(1967)发现 高度磷酸化的含丝氨酸（Ser)，天门冬氨酸（Asp)的酸性蛋白。占非胶原蛋白的50%。 DPP的合成、分泌和分布 Veinstock等用3H、33P标记丝氨酸，磷酸根（小鼠） Munksguard等在牙髓细胞的培养加入3H—丝氨酸、33P—磷酸根 Rabie等用胶体金抗体标记 DPP提取 DPP的生物学特性 （1）亲水性、强酸性、等电点1.1 （2）含磷量高：5.9% （3）分子量：范围大，种属间有差异 大鼠30-100KD，小鼠72KD 牛35-158KD， 人140KD左右 （4） 氨基酸组成 （5） 氨基酸序列及分子结构 1996年Crossley等在IADR上 报告，牛DPP氨基酸序列：Asp-Pse-Pro-Asn-Pse-Pse[Asp-(Pse)n]x, n=1-3,X为未知数 最近George(1998)报告大鼠切牙DPP C末端有（DSS)n、(SD)m重复结构，磷酸化有结合Ca2+能力，n≥3与Ca2+结合能力强 目前已了解大鼠、小鼠、牛、人的氨基末端序列和功能片段。 1998年Gu等用RT-PCR技术克隆了人DPP cDNA，经分析与人牙根分离出的DPP N端序列相符。 MacDougall等从小鼠牙本质DNA克隆获得DPP-DSP复合物。 DPP的功能 （1）DPP 诱导和促进生物矿化的作用 DPP与Ca2+ 有强的结合能力 具有与Ca2+ 结合的高亲和力位点(Ser磷酸化） 结合Ca2+ 的能力：一个PO43-结合1.5个 Ca2+ 127和176mol Ca2+ /molDPP 结合Ca2+ 能力与DPP结构特点有关（George 1998)(DSS)n和（SD）m磷酸根、羧酸根位置。 DPP诱导调节HAP晶体形成 DPP与胶原结合，改变立体化学结构，HAP晶体成核作用。Lussi(1998) Hunter(1996)证明 DPP结合到HAP晶体的特殊平面，调节晶体大小 DPP对胶原的作用 DPP对牙本质矿化作用 DPP分布矿化前沿 DPP种植诱导牙本质形成 Lussi和Linda(1993), Vanden Bos(1994) (2) DPP抑制生物矿化作用 Lussi等研究：DPP浓度40ug/ml抑制HAP晶体形成，DPP浓度160ug/ml晶体形成完全被抑制。 Clarkson等：可溶性DPP有一定的抑制牙本质再矿化作用。 人牙本质磷蛋白的研究 人DPP提取 人DPP生物学特性 人DPP生物学作用 人DPP分离纯化 本研究结果与国外学者基本一致，说明富含天门冬氨酸、丝氨酸的人DPP，含磷量高，具有与钙结合，诱导生物矿化的分子基础。 钙磷含量的测定测定各150mg凝胶颗粒的表面Ca、P沉积量 实验动物：小型猪一周龄14-20Kg，选实验牙—第 一恒磨牙20颗，下颌切牙10颗, 牙随机分组，DPP盖髓，观察2周、1月、3月 结果：处死动物，实验牙切片HE染色 结论：DPP对牙髓损伤的修复过程比氢氧化钙更快诱导修复性牙本质形成。 DPP对培养的人牙髓细胞的作用 结果 再矿化液中钙含量测定 显微放射照片的平均吸光度检验 人牙本质磷蛋白基因片段的克隆和表达 目的： 利用分子生物学技术克隆和表达包 含功能区的人DPP片段，以便通过人 DPP功能片段研究促进牙齿生物矿化（发育和修复功能）作用的研究。 人DPP基因全序列的亚克隆及其5’端序列的克隆分析 通过酶切分析和DNA序列测定，证实DPP重组质粒（pBlueBacHis 2-DPP)带有人DPP基因。 通过基因亚克隆建立了带有人DPP基因的稳定克隆株。 采用分子克隆技术构建了含人DPP基因5’端序列的重组质粒pT-DPP-N并进行测序。 pT-DPP-N质粒（含DPPcDNA5’端序列） 生化特性：168个氨基酸，富含天门