端粒酶检测方法的研究进展.pdfVIP

中国实验诊断学 　2005 年 6 月 　第 9 卷 　第 3 期 — 477 — ( ) 文章编号 :1007 - 4287 2005 03 - 0477 - 04 端粒酶检测方法研究进展 1 1 2 张传宝 ,郭 　健 ,张克坚 ( 1. 北京医院卫生部临床检验中心 ,北京 100730 ;2 . 国家药品监督管理局药品审评中心) 　　端粒酶与人类恶性肿瘤之间的紧密联系使它成为 目前 3 　TRAP 改良方法 已知的最为广泛的肿瘤分子标记物之一 ,端粒酶的检测对癌 TRAP 是测定端粒酶活性最常用的检测方法 , 因其存在 症的早期发现 、发展和预后有重大意义 。端粒酶检测方法从 定量困难和易受 Taq 酶影响而出现假阴性结果的缺点 ,有学 原始的端粒重复序列延伸到 TRAP , 以及现在采用的定量实 者针对这两点进行了改进 :一是加入内对照 , 防止假阴性结 时荧光 RTPCR 方法 ,从粗略定性逐渐发展为现在的准确定 果 ;二是与免疫荧光等技术结合使其易于定量 。 量 ,方法稳定性 、可靠性逐渐完善 ,操作也变得更为简便 。本 31 　加内对照 TRAP 法 [4 ] 文就端粒酶的测定方法的研究进展进行介绍 。 Wright 等 于 1995 年报道此法 ,主要原理是以 150 bp 大 1 　端粒重复序列延伸方法( Telomere extension assay) 鼠肌浆蛋白基因片断为内对照 ,设计 TS 、CX 与肌浆蛋 白的 [ 1] 复合引物 ,进行 PCR 扩增 ,扩增产物的5 ’和 3 ’端分别含有 TS Morin 等 于 1989 建立此方法 ,是根据端粒酶能合成 、 延伸端粒特性而设计的。主要原理是 :首先从新鲜或 - 70 ℃ 与 CX 序列 。在 TRAP 检测时 ,加入此扩增产物作为内对照 冻存的细胞中制备 S100 提取液 , 因端粒酶含 RNA 组分 ,在 模板 ,结果可见 186 bp 内对照带 ,如果内对照带不出现 ,则提 提取及检测过程中要求无 RNA 操作 , 防止模板 RNA 降解 。 示 PCR 反应存在问题 ,从而可以排出假阴性结果 。 ( ) 32 　端粒酶重复序列扩增闪烁亲近法( TRAPSPA) 而后进行端粒重复序列合成 ,加入 TTAGGG 3 引物 ,合成延 [5 ] ( 伸 TTAGGG 重复序列 。反应液中 ,含 2 mM dATP ,2 mM dTTP , Ericka Savoyshy 等 将 TRAP 与闪烁亲近法 Scintillation 32