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谷胱甘肽(Glutathione,简称GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的具有多种重要生理功能的活性三肽,化学名称为γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸(γ-L-Glutamyl-L-Cysteinyl-Glycine)(图1)。GSH的相对分子质量为307.33,熔点189~193℃(分解),晶体呈无色透明细长柱状,等电点为5.93,溶于水、液氨和二甲基甲酰胺,而不溶于醇、醚和丙酮。GSH分子中含有一特殊肽键γ-谷氨酰胺键,其保护肝脏等许多特殊性质均与此肽键有关;GSH分子中含有一个活泼的巯基-SH,易被氧化脱氢,2分子GSH脱氢后转变为1分子氧化型谷胱甘肽(GSSG)。GSH广泛存在于自然界中,动物肝脏、酵母和小麦胚芽中都含有丰富的GSH,其含量为1~10mg/g,人和动物的血液中也含有较多的GSH,而植物组织中的GSH含量则较低。 图1　谷胱甘肽的化学结构 GSH在生物体内有着多种重要的生理功能,特别是对于维持生物体内适宜的氧化还原环境起着至关重要的作用,GSH的生理功能主要有以下几个方面: (1)保护肝脏,治疗各种肝类疾病[2]。GSH强大的还原作用使肝细胞膜对氧自由基的耐受性增加,从而使GSH具有促进肝功能,保护肝细胞膜,提高肝脏酶的活性,加快黄疸的消退,增强肝脏解毒等功能,可用于辅助治疗重型病毒性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝,对药物性肾和肝损害也有保护作用。 (2)治疗肿瘤,减轻化疗和放疗的副作用。GSH能激活多种酶(如巯基-SH酶),从而促进糖、脂肪和蛋白质代谢,并影响细胞的代谢过程,同时通过巯基与体内自由基结合,可以转化成容易代谢的酸类物质,从而加速了放化疗产生的自由基的排泄。因此GSH有助于减轻化疗、放疗的副作用,且对化疗、放疗的疗效无明显影响,故在不影响化疗、放疗药物的细胞毒效应时保护了正常组织和器官,从而增强了化疗、放疗治疗肿瘤的效果。 (3)治疗眼科疾病,特别是应用于白内障的治疗。GSH高浓度存在于眼组织的水晶体、角膜、视神经、视网膜及睫状体内,有益于角膜或水晶体透明性的维持以及组织再生与修复。 (4)解除中毒,减轻空气污染和食物中的有毒成分对人体造成的伤害。GSH能与进入机体的有毒化合物(如:丙烯腈、氟化物、CO)、重金属离子等直接结合,并促其排出体外,起到中和解毒的作用[5]。 (5)抑制HIV。近年来发现GSH还具有抑制艾滋病病毒的功效。 (6)其他功能。GSH具有较强的抗氧化作用,广泛应用于食品和保健品行业,还具有增强免疫力、治疗糖尿病神经损害、抗炎、抗癫痫、镇痛,保护血管、神经和听力等作用[4]。 发酵法 利用特定微生物的代谢将廉价原料转化为GSH的方法。自1938年实现了由酵母制备GSH以来,发酵法生产GSH的工艺及方法不断得到改进,且发酵使用的细菌或酵母容易培养,原料容易获得,条件容易控制,因此发酵法已成为目前生产GSH最普遍的方法。GSH市场需求较大,但由于酵母细胞的GSH含量较低(仅为细胞干重的0.5%~1%)、酵母用量大、收率低等缺点,现有生产能力不能满足市场需求。 组成为：葡萄糖，酵母粉，KH2PO4，K2HPO4·3H2O，MgSO4，pH自然。 目前许多研究尝试利用添加前体物质比如葡萄糖、氮源、ATP以及磷酸盐等来提高谷胱甘肽的产量。微生物发酵生产谷胱甘肽,氨基酸前体的添加极其重要,因其具有促进合成及抑制合成的双重作用。有人通过对发酵动力学的研究,首次采用指数流加发酵法,经过48 h培养,获得了857.2 mg/L的谷胱甘肽,提高了产量,得率以及生产强度;胡林华等[12]对原始菌株进行紫外诱变处理,结合甲硫氨酸抗性筛选分离,连续两代诱变获得谷胱甘肽的高产突变株,产量达到180 mg/L以上。对培养基成分及培养条件进行优化能更好的提高谷胱甘肽产量。 3　市场分析 谷胱甘肽在临床上可用于保肝护肝、治疗肿瘤、治疗眼科疾病、解除中毒、抑制HIV等,效果明显且无毒副作用。我国是目前世界肝病最严重的国家之一,尤其在偏远农村,乙型肝炎病毒携带者达到30%以上,严重地影响了国民身心健康。重庆药友制药有限责任公司的产品阿拓莫兰(通用名谷胱甘肽)临床使用表明,谷胱甘肽疗效确切,并被广泛应用于临床,已成为2004年北京护肝药医院市场第一品牌,年销售额达4亿元人民币以上。随着我国人民生活水平的提高,人们对生命质量的认识和身体保健意识日益增强,谷胱甘肽作为生命活性物质也已进入医疗、保健品行业,同时作为保健抗氧化剂,在食品和日化行业的应用越来越广泛。尤其是在2003年抗击非典的过程中,作为辅助治疗药物,谷胱甘肽发挥了重要作用。日本很早就开始用发酵法生产原料药谷胱甘肽的研究,其中利用酵母发酵的