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多糖类药物的毛细管电泳分析方法及其应用 丁 侃 方积年 （中国科学院上海药物研究所 上海 200031） 提 要 从迁移、检测和应用3方面综述了多糖药物毛细管电泳在近20年来的研究进展。 关键词 毛细管电泳，多糖类药物，分离，定量分析 分类号 O658 物在电解质中易于迁移，须增加中性多糖类药物的 1 前言 电荷。现采用最多的仍是已被广泛应用于单糖及寡 新兴的糖生物学是现代科学中的重要学科之 糖的硼酸盐络合剂[3方法，虽然其它阴离子[10甚至 一。多糖类药物更具有复杂的多方面生物活性与功 阳离子[11也能和多糖类药物络合。迁移率增加的程 能，诸如控制细胞分裂，调节细胞生长，此外还有调 度随糖类药物的结构与羟基数 目的不同而不同。从 节人体免疫功能，抗癌，抗菌，抗病毒等作用。 构成多糖的单糖来说，己糖比戊糖迁移快，这是由于 由于多糖类药物结构极其复杂，进行分离纯化 前者比后者含有更多的羟基而易于与硼酸盐络合。 以及纯度鉴别较困难，因而必须寻求高效分离和高 络合物的稳定性取决于羟基的构型,键的二糖比 灵敏度检测的方法。毛细管电泳(CE)是80年代后期 键的二糖淌度大。淌度与糖的C2～C43个羟基的构 迅速发展起来的一种分离分析技术1，它以快速、高 型关系密切，相对来说C4～C５3位羟基对淌度影响 效和高灵敏度、所需样品少等特点正被广泛地应用 较小25。C2～C4羟基的构型与硼酸盐络合难易顺序 于生命科学的各个领域。在糖生物学中，CE法常用 是e-e赤（醇相邻）,e-t一（个赤醇连一个苏醇）,t-t苏（ 于糖蛋白裂解的单糖和寡糖 2～4的测定。CE法对糖 醇相邻）,t-e一（个苏醇连一个赤醇）。 的分析已有综述5～9。对多糖类药物的CE分离方法 2.2 衍生化 的研究尚属起步阶段。由于 1（）多糖类药物不像两性 糖类衍生化试剂有 2-氨基毗啶[12、6-氨基喹 电解质蛋白那样可以依靠毛细管等电聚焦得到分 啉13、7-氨基-1,3-蔡二磺酸14、3-4（-羧基苯甲酰 离，2（）多糖类药物分子质量大，选用凝胶材料如聚 基-2-喹啉羧基醛(CBQCA)5、四甲基若丹明16 丙酰胺作为筛分介质孔径过大时，分辨率低，不利于 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉酮 (PMP)l7等。用于寡糖和 分离，3（）多糖类药物解离程度十分微弱，电荷密度 多糖的衍生化试剂有氨基吡啶18 喹啉羧基 甲 低，又有较强的亲水性，这样利用样品淌度差异的毛 醛 19 氨基萘磺酸 20,21等 。氨基吡啶和 CBQCA 只与 细管区带电泳(CZE)和利用样品疏水性质差异的胶 具有还原末端的多糖衍生化[22]。对氨基苯 甲酸乙 束电动毛细管色谱(MECC)都难以直接解决其分离 酯[23～25]和对氨基苯甲酸能有效地衍生化醛糖和酮 问题,4（）多糖类药物一般不具备紫外和荧光生色基 糖 ，并成 功地 应用 于 蜀葵根 多糖 中糖 组成 的足量 分 团，分离后直接检测较为困难，所以目前用于多糖类 析[15]。对氨基甲酸和对氨基苯甲酸乙酯衍生的糖类 药物的毛细管电泳分析方法主要是围绕着迁移和检 化合物形成硼酸盐络合物的稳定性有差异，所以用 测及其应用这3个方面来进行研究的。 其中一个衍生化试剂就能把几种不易分离的多糖分 离开 。 2 多糖类药物的迁移 2.3 缓冲添加剂 2.1 多糖类药物的结构与迁移 合适的缓冲添加剂能诱导或减少某些多糖类的 淌度而影响其迁移 1 对于电何密集的多糖类 （如肝 多糖类药物虽然分子质量大，但组成多糖类药 素），可以使用离子对试剂来控制淌度，阳离子电荷 物的单糖种类并不多。常见单糖的解离常数不同，所