酿酒酵母的大规模液体发酵生产.pptVIP

实验 酿酒酵母的大规模液体发酵生产 实验原理 本实验通过对15升中型发酵罐的了解及使用，将整个微生物发酵生产过程分成几个阶段，系统的表现了发酵生产工艺流程，包括使用发酵设备前期整个设备给水、给无菌空气、给高压蒸汽管路及其排放管路的了解，以及在实际操作过程中各个管路之间的切换，发酵用各个检测设备的标定。并以酿酒酵母的纯化培养开始、再进行摇瓶放大、最后实现发酵罐的发酵生产的具体实验过程，让学生学会在发酵过程中能够分阶段的进行采样检测，根据检测值对发酵的条件进行必要的调节，最后对于发酵所得到的产物进行必要的分离纯化，制成成品并保存，从而掌握整个发酵生产工艺流程的具体实施过程。 实验简介 15升发酵罐图示 发酵罐罐路示意图 空气流量计 电加热器 冷凝管 空气 水 蒸气 A03 A02 A01 S03 S01 S02 VT1 V01 P02 W01 C01 W03 W02 罐体 管路说明 一、空气及其净化 来自空压机的压缩空气经净化器（外接减压稳压器、除水、除尘、空气预过滤器）进入发酵罐空气总管，空气流量计A01、阀A02、单向阀、空气过滤器、阀A03到达反应器内，尾气经阀排出，本管路具有计量、净化作用。注：空气流量级显示的流量是以过滤器前的压力下的流量，不是标准状态下的流量。 二、蒸汽 蒸汽进夹套 蒸汽经阀S01进入夹套（上进），经阀V01排出冷凝水。蒸汽对培养基预热。 蒸汽进反应器 蒸汽经阀S02、单向阀、空气过滤器、阀A03进入罐内，由排气口控制阀VT1排出。蒸汽对过滤器及空气管线消毒。 蒸汽进取样阀及放料阀 蒸汽经阀S03进入取样阀，由阀P02排出冷凝水。蒸汽对取样阀及底阀灭菌。 三、自来水 自来水进夹套 当电磁阀C01打开时，自来水经自动注水阀、阀W01进入反应器夹套（下进），由夹套上口、阀W02、加热器、电磁阀C01排出；当电磁阀关闭时，夹套水经W02进入电加热器、循环泵、单想阀进入夹套（下口），通过夹套水的循环，将加热器的热能带入夹套，通过夹套的换热加热发酵液。注：温度自动前必须对夹套注水 自来水进排气冷凝器 自来水经阀W03进入排气冷凝器，对发酵尾气进行冷却尽可能减少培养基的水分蒸发。 实验步骤 葡萄糖 1g 氯化钾 1.8g 酵母浸膏 2.5g 醋酸钠 8.2g 蒸馏水 1000mL 一、发酵前的准备工作 1．酵母菌活化：由种子活化到试管斜面上。 2．按照下列配方配制麦氏（Meclary）培养基300ml，113℃灭菌20min。 将300ml种子培养液分成两份，无菌操作取酿酒酵母菌斜面菌苔，接种于种子培养液，摇床培 养24－48小时。 3．补料液的配制及灭菌：配制0.2mol/L NaOH溶液、0.6mol/L HCl溶液、食用油分别装入补料瓶中，将连在补料瓶上的橡皮管，用绳子扎紧，121℃灭菌20min。 4．培养基的制备：酵母膏25g、NaAc82g、KCl 18g、葡萄糖10g。加水溶解搅拌均匀。 5．溶氧电极标定： 零点标定：将电极拔出浸没于饱和的无水亚硫酸钠溶液中，待电极显示值稳定后标零点1％。斜率标定：溶氧电极的斜率（满度）标定一般在发酵之前，温度、罐压、通气量均在正常情况下进行，一般以100％标定，因为它是个相对值，也可以是其他数值，罐压对溶氧量影响较大，标定时应保持罐压相对稳定。 6．pH电极标定： pH电极零点和斜率不能在发酵状态下标定，只能在灭菌以前进行，但可以在发酵过程中进行零电位补偿。标定前电极需泡于液体中并已联机1小时以上，通常采用两点标定法：先将电极洗净擦干，然后浸入6.86缓冲液，并将零点标定值设为6.86，然后按开始标定键，待pH显示值稳定后可按零点标定结束键，然后洗净擦干电极后同样方法标定斜率，然后再标定零点，反复至更换缓冲液时，pH未经标定已达标准值（附近）即可。 7．蠕动泵流量标定 蠕动泵的标定随时可以进行。可以对酸、碱泵、补料泵、消泡剂泵进行标定，方法相同。先取定量的液体，安装好，然后在标定画面上设为标准容量。然后将手、自动开关调节到手动位置，使泵运转并将管内空气排出开始滴液，将出口液体滴入标准容器，同时按标准开始键并确定，此时开始以秒为单位计数，待输出液体到达设定的标准容量时，再按确定。整个标定过程结束。此时，加料速度便由控制器显示出来。标定结束后将开关置于“关”的位置。 8．将4步骤配制好的培养基加入发酵罐中，加水至体积约11.5升（防止水蒸发过多）。 二、实罐灭菌操作 1、准备 盖紧罐盖上的各种盖帽，旋紧罐盖上的压紧螺栓， 关紧发酵罐底阀P01，倒入培养基，调整pH值，旋紧接种口。 关排气冷凝器进水W03，移去进出口的软管排尽冷凝水夹套中的水 2、培养基预热 准备工作 预先启动蒸汽发生器及空气压缩机。