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活菌计数能力比对分析 张媛，丁家波，李建，张磊，李旭妮，刘轶秋，王楠，徐磊 (中国兽医药品监察所，北京100081) 摘要 目的：全面了解各检验员活菌计数的能力，促进各检验员提高活菌计数结果的准确性，探究方法间的结果差异， 寻求更简便、准确的计数方法，提高检验水平。方法：各检验员同时同环境对同一细菌培养物采用常量法和微量法两种方法 进行活菌计数，采用稳健统计技术z比分值分析法对不同人员相同方法的活菌计数结果进行统计，将不同人员的检验结果分 为“满意”、“可疑”和“不满意”；采用t检验法对使用不同方法对同一样品的计数结果进行统计，将不同方法的检验结果分 为“差异显著”和“差异不显著”。结果：1名检验员的检验结果出现了正偏离，两种方法的检验结果差异显著。结论：用微 量法进行检验，人员之间的差异更大，需建立标准操作规程，统一操作细节，规范操作手法，以缩小人员之间的差异，需开 展长期的、多次的比对活动，获取更多实验数据来比较常量法和微量法的优劣。 关键词： 活菌计数；能力比对；稳健统计技术；t检验法 活菌计数不仅是兽用生物制品检验中的一个重要检验参数，而且在临床微生物检验中也会经常用到。 为了全面了解各检验员活菌计数的能力，促进各检验员提高细菌计数结果的准确性和有效性，探究方法间 的结果差异，寻求更简便、准确的计数方法，提高检验水平，中国兽医药品监察所细菌制品检测室组织该 室的8名检验员开展了细菌活菌计数人员比对及方法比对活动，可以为兽用生物制品行业开展能力比对活 动提供有益的参考。 1材料与方法 1．1样品的制备制备大肠杆菌菌液、多杀性巴氏杆菌菌液及丹毒杆菌菌液，并制备普通琼脂平皿、含0．1％ 裂解血细胞全血及4％胎牛血清马丁琼脂平皿、含10％胎牛血清马丁琼脂平皿各48付，待用。 第6管稀释液以2ml+4ml的方式进行3倍稀释，取稀释后的菌液0．1ml接种适宜的琼脂培养基平板，3平板／样。 轻轻转动平板，使菌液在琼脂表面散布均匀。36～37℃培养适宜时间。 u ul+900u 微量稀释法：吸取100l菌液，用适宜的稀释液以100 l的方式连续10倍梯度稀释6管，取第 lZ1+400u u 6管稀释液以200 l的方式进行3倍稀释，取稀释后的菌液100l接种适宜的琼脂培养基平板，3平 板／样。轻轻转动平板，使菌液在琼脂表面散布均匀。36～37℃培养适宜时间。 1．3结果的处理及评价方法的确立 法，测定Z比分值，用于分析各检验员在总体检测结果中所处的位置。z比分值采用x、x。、NormIQR来确定 ：2] Z比分值计算公式：Z=(X-Xv)／NormIQR 式中：z为稳健比分值：：X为检验数据；X*为中位值；NormIQR为标准化四分位距。 I Z z z 判定标准为： I≤2为满意结果；2II3时，表示结果可疑； I≥3为不满意结果。 1．3．2方法比对t检验是数理统计中一种检验平均值的检验方法，可用于检查分析方法或操作过程是否 存在较大的系统误差。首先根据检验数据求出平均值x及样本标准偏差S，将有关数据代入计算公式中计算 得到的t临界值比较，如果前者小于后者，则认为二者之间无显著性差异旧。。 t值计算公式”。： ·——843·—— 第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 。 f垒!羔二塑兰皇!±尘!至=尘：；!茎!．塾羔!兰坌 t=——』至堇生一 ～ n1+11．2—2 nln2 式中：x。一第一次检验测量数据的平均值； xz一第二次检验测量数据的平均值； sl一第一次检验测量数据的标准偏差： sz一第二次检验测量数据的标准偏差； n·一第一次检验测量的测量次数；