基于生物信号纳米放大技术戊肝病毒检测基因芯片.pdfVIP

( ) 第 53 卷 第 4 期 武汉大学学报 理学版 Vol . 53 No . 4 　 　2007 年 8 月 J . Wuhan U niv . (Nat . Sci . Ed . ) Aug . 2007 ,475～480 文章编号 :167 18836 (2007) 基于生物信号纳米放大技术的 戊肝病毒检测基因芯片 杨 　永 , 翟建新 , 王业富 (武汉大学 生命科学学院 , 湖北 武汉 430072) ( ) 　　摘 　要 : 建立了一种利用“双探针夹心银染”技术快速检测戊型肝炎病毒 H EV 的基因芯片方法. 提取的病毒 核酸经过 R TPCR 扩增 ,PCR 体系中用掺入生物素修饰的 dU TP 扩增得到带有生物素的核酸片段 ,5′末端N H 修 2 饰的同源寡核苷酸作为捕获探针固定到处理后的玻片上 ,该探针识别病毒的带有生物素的核酸片段 ,而链霉亲和 素标记的胶体金与生物素紧密结合 ,通过银沉积在金颗粒表面放大信号可以目视结果. 采用该方法对已经确证的 86 个血清样本进行检测 ,检出 52 个阳性和 34 个阴性样本 ,结果与荧光定量 PCR 检出一致. 关 　键 　词 : 纳米颗粒 ; 生物素 ; 链霉亲和素 ; 戊肝病毒 ; 基因检测 中图分类号 : Q 78 　　　文献标识码 :A 应用. 随着分子生物学的迅速发展 ,胶体金标记技术 0 　引　言 也逐步发展成为研究基因功能的重要手段. 近年来 , 越来越多的科学家选择胶体金来取代上述标记物 , ( ) 　　戊型肝炎 hep atiti s E 是一种经粪口传播的急 [ 6 ] Mir kin 等 报道了一系列使用胶体金标记核酸探 性传染病 , 其病原体戊型肝炎病毒 ( hep atiti s E 针的基因芯片方法 , Alexand[7 ] 使用银染来提高金 vir u s , H EV) 呈球形直径 27～34 nm ,无囊膜 ,在分 类学上属于杯状病毒科[ 1] . 1983 最早由Balayan 等 信号 ,达到更高的灵敏度. 本文提出了一种“基于生物信号纳米放大”的基 人使用 IEM (immuneelect ronic micro scop e) 方法 发现病毒颗粒[2 ] . 相继发展了蛋白印记 、放射免疫和 因芯片检测戊型肝炎病毒的方法 ,主要利用了生物 酶联免疫等免疫学方法检测 H EV 抗体 IgM