2014-2015学年高二生物课件：第一部分实验二《微生物的培养和利用》课件2（浙科版选修1）[ 高考].pptVIP

* * * 微生物所需的营养素有哪些 ? 大肠杆菌培养基(LB培养基)配方： 酵母提取物???0.25g 蛋白胨? ??0.5g Nacl????? 0.5g 水 50ml 琼脂???? 1g 水、碳源、和 氮源、 无机盐、生长因子等营养物质 选择培养基 定义：是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。 实例应用： 1、培养基中加入抗生素可以筛选出抗生素抗性菌 2、培养基中缺乏碳源时，可筛选出自养型生物 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 一、实验目的： 1. 使用专一的培养基（含尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌） 2.使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应。 二、实验原理： 脲即尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源(反应式) (NH2)2C=O+H2O 2NH3+CO2 脲酶 本实验利用尿素培养基分离出土壤中能利用尿素的细菌，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性，可用酸碱指示剂颜色的变化检测 (1)全营养LB固体培养基：蛋白胨0.25g、酵母提取物0.12g、 NaCl 0.25g、琼脂0.5g、加水25ml。 (2)尿素固体培养基：0.025g葡萄糖、NaCl 0.12g、K2HPO40.12g、 酚红0.25mg、琼脂糖0.5g、加水15ml。 灭菌冷却到60℃时加入经G6玻璃漏斗过滤 （使其无菌）的尿素。 酸碱指示剂： 酸黄碱红 三、设备及用品：P25 四、实验材料： （10倍稀释法：0.5mL悬液 +4.5 mL无菌水，摇匀即可） 2.制备细菌悬液： 1g土样+99 mL无菌水 10-2土壤稀释液 并依次制备出10-3～10-5稀释液。 振荡10min 3、涂布分离法分离细菌： 取10-4和10-5稀释液各0.1ml，分别加到尿素培养基与LB培养基上，用玻璃刮刀将菌液涂布分离 4、倒置培养 5、观察：比较LB培养基与尿素培养基上的菌落 五、实验步骤 1.制平板：LB固体培养基与尿素固体培养基 对照组： LB固体培养基 实验组：尿素固体培养基 各浓度做3个培养皿 1克土样 99 0.5 0.5 0.5 0.5 各盛有 4.5ml 无菌水 -5 -5 -5 -6 -6 -6 分析与讨论： 1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？ 2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物，如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选 如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解，水解后的氨使土壤变成碱性，与其他阴离子形成化合物则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用所形成的氨，有利于自然界的氮循环 3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现？ 4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落？ 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中的尿素水解，尿素分解后产生氨，氨为碱性，酚红在酸性环境中为黄色，在碱性环境里变为红色。培养基中的酸碱指示剂产生颜色变化，标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强 能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少数量。因为人和其他哺乳动物产生的排泄物毕竟是少量的，而且尿素还可以在高温下自然分解，因此，以尿素为氮源的菌群较少 1、土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答： KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10 g 尿素 1 g 琼脂 15 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100 mL ????????????????????????????????????????????????????? （1）培养基中加入尿素的目的是筛选???