2014-2015学年高二生物课件：第一部分实验一《大肠杆菌的培养和分离》课件12（浙科版选修1）[ 高考].pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 实验1： 大肠杆菌的培养和分离 大肠杆菌（E.coli） 分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、 污水、土壤、谷类、乳制品等当中。 大肠杆菌在人体的_____中一般对人体无害，但任何 大肠杆菌如果进入__________都会对人体产生危害。 大肠杆菌是_______工程中被广泛采用的工具。 肠道 泌尿系统 基因 革兰氏______（填阴或阳）性菌 阴 代谢类型： 异养，兼性厌氧型 生长适宜温度： 质粒、 EcoRⅠ限制酶、 E.coli-DNA连接酶、 受体细胞 37℃左右 细菌的代谢类型 自养型细菌 异养型细菌: 光合自养型: 化能自养型: 大部分腐生菌和寄生菌 如蓝细菌 如硝化细菌 1、同化作用类型 2、异化作用类型 需氧型细菌 厌氧型细菌 兼性厌氧型细菌 大多数细菌 如破伤风杆菌 如酵母菌、大肠杆菌。 大肠杆菌属于异养、兼性厌氧型细菌 大肠杆菌 酵母菌 放线菌 霉菌 菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。 不同微生物形成的菌落具有不同 的特征，是鉴定菌种的重要依据。 如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。 菌落的概念 白色或乳白色，光滑 大肠杆菌菌落： 三 培养基 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3、调节pH 1、培养基的种类 2、成分 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子 (生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) 真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5 4、有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压 (固体、半固体、液体) 1.无菌操作的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止________污染的方法。 四、无菌操作 _________必须无菌、 _________也必须要无菌、 ___________时不能带入其他杂菌 主要包括： 杂菌 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒：使用较温和理化因素，仅杀死物体表面或内 部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死 芽孢和孢子。 灭菌：使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生 物，包括芽孢和孢子。 各种器具 培养基 转移菌种 高压蒸汽灭菌 洒精灯灼烧灭菌 干热灭菌 灭菌方法： 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂消毒法（酒精、氯气等） 紫外线消毒法 消毒方法： 3、常用的灭菌和消毒的方法 培养基、无菌水、 各种耐高温的玻璃金属器具 需要保持干燥 耐高温的玻璃金属器皿 接种环等金属器具 高压蒸汽灭菌锅 1kg/cm2 、121℃ 下维持15min. 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 （一）制备LB培养基（通用的细菌培养基） 1、配方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克， 氯化钠0.5克，水50ml （配固体培养基再加琼脂1克） 溶解 计算称量 调pH 分装 加塞，包扎 2、流程 四 操作步骤 灭菌 倒平板 ①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。 ②加塞：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或报纸封口。 ③包扎：用________或报纸 三角漏斗 棉花塞 封口膜 6层纱布 牛皮纸 牛皮纸 高压蒸气灭菌法 ④灭菌 1）加水： 2）装锅： 向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_________. 物品放置的要求______________________： 加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_______内。 再以________方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺 栓松紧一致，勿使漏气。 不触及内胆 整齐、稳定、留出空隙 排气槽 两两对称 3）加热排气： 4）保温保压： 5）出锅： 打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的 _______。_________________后，关上排气阀。 当锅内压力升到_______kg/cm2时，控制 热源，维持压力至______min。 切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压 力降至____时，打开________，旋松螺栓，打开 盖子，取出灭菌物品。 冷空气 待冷空气完全排尽 0 1 15 排气阀 否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差 可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而 发生污染，甚至使容器爆炸。 灭菌后，通常将实验用具