2014-2015学年高二生物课件：第一部分实验一《大肠杆菌的培养和分离》课件10（浙科版选修1）[ 高考].pptVIP

实验1 大肠杆菌的分离与培养 实验时间：2011.5.23 实验原理 1 实验器材与药品 2 实验步骤及现象 3 实验结果与分析 4 实验反思与总结 5 1.利用液体培养基可以扩大培养大肠杆菌； 2.利用固体培养基对大肠杆菌进行划线分离、培养，目的是获得单菌落； 3.利用附加抗生素的培养基筛选含有重组DNA的受体细胞。 实验原理 器材：高压灭菌锅，培养皿，恒温水浴锅，恒温培养箱，摇床，酒精灯，涂布器，接种环，移液枪，电子秤，锥形瓶； 药品：LB液体和固体培养基，去离子水，70%酒精，氨苄青霉素，大肠杆菌，含有重组DNA的大肠杆菌。 实验器材与药品 实验步骤及现象 1号 转基因 涂布 3号 混合 涂布 5号 普通 划线 2号 转基因 涂布 4号 混合 涂布 6号 普通 划线 1.筛选分离含有重组DNA的受体细胞 ①设置对照组（2、4号）和实验组（1、3号）； ②向实验组培养皿中加氨苄青霉素 ③向1、2号加含有重组DNA的大肠杆菌 向3、4号加混合大肠杆菌（既有普通的，也有转基因的） 实验步骤及现象 ④用涂布器涂布 i.用酒精灯灼烧涂布棒（靠近涂布端的手柄也要灼烧）静置冷却（以防温度过杀死微生物）。 ii.用移液枪取50μl的大肠杆菌加至培养基上。 1000μl=1ml iii.用涂布棒将其均匀涂布于平板上。 iiii.静置5min，倒置培养于37°C的培养箱中。 ⑤在培养皿壁上写、姓名、实验名称，一天后调查统计各个处理菌落数目。 实验步骤及现象 2.大肠杆菌单克隆的分离与培养 ①设置对照组（6号培养皿）和实验组（5号培养皿）。 ②向实验组培养皿中加入氨苄青霉素 实验步骤及现象 ③用接种环划线 i.将接种环放在火焰上灼烧，直到其烧红。 ii.在火焰旁冷却接种环，同时打开离心管。 iii.在火焰旁将已冷却的接种环伸入普通大肠杆菌菌液中，蘸取一环菌液，盖上试管。 iiii.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。 iiiii.灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线，重复这一操作，在三、四、五区域划线。 实验步骤及现象 ⑤划完线在培养壁上写班级、性名、实验名称，放在37°C培养箱中倒置培养，一天后处理菌落数目。 3.配制LB固体培养基 ①1.28g固体培养基，40ml的水（一瓶加氨苄青霉素，另一瓶不加） ②灭菌 ③倒平板 实验步骤及现象 未加氨苄青霉素 所加菌液：转基因 分离方法：涂布 现象：分布均匀，数量适中。 实验结果与分析 未加氨苄青霉素 所加菌液：混合 分离方法：涂布 现象：分布均匀，但有杂菌。 实验结果与分析 未加氨苄青霉素 所加菌液：普通 分离方法：划线 现象：无大肠杆菌，但有几个黄色杂菌。 实验结果与分析 加氨苄青霉素 所加菌液：转基因 分离方法：涂布 现象：分布均匀，相对较多。 实验结果与分析 加氨苄青霉素 所加菌液：普通 分离方法：划线 现象：有菌，集中分布，不均匀，相对少。 实验结果与分析 加氨苄青霉素 所加菌液：混合 分离方法：涂布 现象：分布均匀，数量较多，但有黄色透明杂菌。 实验结果与分析 实验结果与分析 这次实验过程中，总的来说较上次在分工方面有了显著的提高，故而实验做的比较有序。 但美中不足的是实验结果依然与预期有不同之处：①培养基被标记错误②杂菌较多，无菌操作不够规范。 可能还是对实验的预习不够明确，所以在实验时总是忘记要在酒精灯旁操作这一要求，在下次试验中一定会多加注意。 实验反思与总结 Thank You