生物素2亲与素放大酶联免疫吸附法测定双酚A.pdfVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究简报 第 8期 　　　　　　 　　　　　 　　　　　　　　 　　　 2005年 8月 Ch ine se Journal of Analytical Chem istry 1122 ～1124 生物素 亲和素放大酶联免疫吸附法测定双酚 A 魏孔吉 　赵美萍 　李元宗 　常文保 (北京大学化学与分子工程学院 ,北京 10087 1) 摘 　要 　建立了可用于快速 、灵敏地检测双酚 A 的生物素 - 亲和素放大酶联免疫吸附测定法 ,测得最佳实验 5 条件为包被抗原浓度为 13. 8 m g/L、抗体稀释为 2. 4 ×10 倍 ,生物素化二抗和酶标亲和素的最佳稀释倍数分 μ μ 别为 2000倍和 500倍 。在优化条件下 ,方法的线性范围 0. 2 ～1000 g/L ;最低检出限 0. 05 g/L 。所建立的 方法用于食品和唾液中双酚 A 含量的测定 ,样品处理简单 ,结果满意 。 关键词 　双酚 A ,生物素 亲和素放大酶联免疫吸附分析法 ,食品 ,唾液 1　引　　言 双酚 A ( b isp heno l A , B PA )是塑料工业的一种重要原料 ,广泛用作食品包装材料 [ 1 ] 。B PA 制成的树 脂还可用作牙科治疗的包封剂或填充物 [ 2 , 3 ] 。已有研究报道 B PA 可从治疗后的牙齿中渗漏到唾液中 , 在有聚碳酸酯涂层的罐装食品中也已检测到了 B PA [ 4 , 5 ] 。由于双酚 A 对生物发育和生殖功能的破坏作 用 [ 6, 7 ] ,食品和唾液中痕量 B PA 的检测对保障食品安全和医疗安全等都具有十分重要的意义 。 目前检测 B PA 的方法以色谱分析法为主 [ 8 ] 。在环境水样的检测方面经过预浓缩和衍生化等步骤 μ 检出限一般可以达到 g /L 以下 ,但对于食品和生物体液样品 , 由于基体组成复杂 ,色谱分析前的样品 处理步骤繁琐 ,有限的实际样品量 ,限制了预浓缩的倍数 。高灵敏度的检测方法国内外报道得都很少 。 免疫分析基于抗原 抗体间的特异性结合反应 ,选择性好 ,通过选用合适的标记体系 ,可实现对复杂 ( ) ( ) 体系中痕量物质的快速灵敏检测 。本研究以 4 , 4 双 4 羟基苯基 戊酸与牛血清白蛋白 B SA 偶联获得 的全抗原免疫家兔 , 已成功制得了 B PA 的多克隆抗体 ,并建立了基于酶标二抗体系的竞争型 B PA 酶联 免疫吸附测定方法 [ 9 ] 。本实验进一步采用生物素 亲和素放大体系 ,使酶联免疫吸附分析法的检测灵敏 度明显提高 ,抗体的消耗量大大减少 ,方法已成功地用于罐装玉米液和唾液等实际样品的测定 。 2　实验部分 2. 1　仪器与试剂 ( ) ( ) TECAN GEN IO S酶标仪 TECAN 公司 ;生化培养箱 哈尔滨东联电子技术公司 。双酚 A 和 4 , 4 ( ) ( ) ( ) 双 4 羟基苯基 戊酸 A ldrich ,美国 。生物素化二抗 、酶标亲和素和酶标二抗 华美生物工程公司 。