应用于PCR技术DNA聚合酶.pdfVIP

第 27 卷第 6 期 长春师范学院学报 ( 自然科学版) 2008 年 12 月 Vol12 7 　No16 ( ) ec. 2008 Journal of Changchun Normal University Natural Science 应 用 于 PCR 技 术 的 NA 聚 合 酶 盛艳敏 , 杨燕平 , 吴英杰 , 王倩倩 (长春师范学院生命科学学院 , 吉林长春 　130032) [ 摘 　要 ] NA 聚合酶作为聚合酶链式反应 ( PCR) 的重要因素之一 , 在 PCR 过程中起着至关重要的 作用 , 在某种意义上甚至可以说 , PCR 技术就是耐热 NA 聚合 酶的技术 。故综合研究聚合酶 并改善 其酶学性能 , 已成为分子生物学工作者关注的热点之 一 。本文就 PCR 技术产生至今 NA 聚合 酶的研 究历史及现状进行简要综述 。 [ 关键词 ] PCR ; NA 聚合酶 ; 酶学特性 [ 中图分类号 ] Q94615 　　　 [文献标识码 ] A 　　　 [ 文章编号] 1008 - 178X (2008) 06 - 0067 - 04 　　 聚合酶链式反应 (PCR) 是一种体外快速扩增特定 NA 片段 的技术 , 是在 由 NA 模板、引物 、dN TP 、 适当缓冲液等组成的反应混合物中 , 由 NA 聚合酶催化 , 对一对寡核苷酸引物所界定的 NA 片断进行扩增 的反应 。在此过程 中 , NA 聚合酶起着关键性作用 , 所以自 PCR 技术产生至今 , 人们一直在通过各种手段 努力寻找高效特异地催化单核苷酸聚合 的 NA 聚合酶 。 1 　 NA 聚合酶的分类 从大肠杆菌 NA 聚合酶 Ⅰ被分离和鉴定至今的 50 年时间里 , 已有 100 多个 NA 聚合酶相关基 因被克隆 和测序 , 它们分别来自于嗜热极端细菌和古细菌 。多种天然的和重组 的耐热 NA 聚合酶也被鉴定和纯化 , 这些酶大部分是单体酶 , 在溶液中的分子量一般为 80～115K [1 - 3 ] 。人们根据核苷酸序列将大肠杆菌酶 NA ( ) ( ) ( ) 聚合酶划分为 四类 , 即 NA 聚合酶 Ⅰ Family A 、 NA 聚合酶 Ⅱ Family B 、 NA 聚合酶 Ⅲ Family C 和 其它的 ( Family X) [4 ] 。 NA 聚合酶 Ⅰ主要参与 NA 损伤 的修复 , 同时在半保 留复制 中起辅助作用 。 NA 聚 合酶 Ⅲ是 NA 复制的主要酶[4 ] 。与大肠杆菌 NA 聚合酶 Ⅰ同源 的为A 群 , 该群除酵母线粒体 NA 聚合酶 Ⅰ 外 , 都来 自于原核生物 , 对双 脱氧核苷酸抑制剂敏感 , 因此可用于 NA 序列分析 。包 括 E1coli 栖热菌属 ( Thermus) 的 NA 聚合酶 Ⅰ、芽胞菌属 ( B acillus) 的 NA 聚合酶 Ⅰ、噬菌体 T 、以及 T N