疏水层析结合冷乙醇沉淀纯化人血清白蛋白.pdfVIP

20 卷 6 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol . 20 　No . 6 2004 年 11 月 Chinese J ournal of B iotechnology November 　2004 疏水层析结合冷乙醇沉淀纯化人血清白蛋白 　 1 1 2 2 1 杨海荣 　罗 　坚 　董爱华 　张计允 　苏志国 ( 1 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 ,北京 　100080) (2 华北制药集团有限责任公司 ,石家庄 　050015) 摘 　要 　将层析技术与冷乙醇工艺相结合用于人血清白蛋白的纯化 ,对各过程所采用的层析介质及层析条件进行 了探索 ,得到了一条从人血浆中制备血清白蛋白的新路线 :将一步冷乙醇沉淀后的血浆上清进行脱盐除乙醇 ,用阳 离子交换介质 CM Sepharose FF 以透过式层析的模式吸附非白蛋白组分 ,最后选用 Butyl Sepharose FF 一步疏水层析 后所得样品经 SDSPAGE 银染显示一条单带 ,分析其纯度大于 99 % ,计算工艺收率为 812 % 。与传统冷乙醇工艺相 比较 ,该工艺最终样品纯度更高 ,且层析可以在常温下操作 ,易实现自动化控制 。 关键词 　层析 , 纯化 , 人血清白蛋白, 冷乙醇沉淀 ( ) 中图分类号 　TQ93 　　文献标识码 　A 　　文章编号 2004 ( ) 　　人血清 白蛋白 Human Serum Albumin , HSA 是 着层析技术的发展和应用 ,从上世纪 80 年代开始 , 由585 个氨基酸组成 的单链非糖蛋 白, 分子量为 瑞典的Berglf [4 ] ,法国的T. Burnouf [5 ] 开始了运用层 66kD 左右 ,是血浆中含量最丰富的一种蛋 白质 ,在 析技术纯化 HSA 的工艺探索 。由于冷乙醇沉淀有 人体内,血清白蛋白的主要生理功能是维持血液渗 病毒灭活的优点 ,澳大利亚的 CSL 公司又尝试将层 透压和携带血液中多种配基与组织进行交换 , 临床 析技术与冷乙醇沉淀相结合 ,并且成功地实现了产 用于手术输血和危重病人补液 , 治疗创伤休克 、发 业化 ,HSA 年产量约 300 吨 ,纯度提高至 995 % ,并 烧 、水肿和低白蛋白血症等 ,而且能增强人体抵抗能 且实现完全自动化控制[6 ] 。综合文献报道的层析技 [ 1] ( 力 ,是 目前临床用量最大的药用蛋白 。 术纯化 HSA 工艺 ,大多为采用阴离子交换 通常为 ) ( ) 目前 , 临床使用的 HSA 依然 由血浆 中制备而 DEAE 配基 结合阳离子交换 通常为 CM 配基 最后 得 。重组 HSA 纯化技术的研究已有将近二十年的