表达抗流感病毒基因重组慢病毒滴度测定及感染效率分析.pdfVIP

动物医学进展， ， （）： ２０１２ ３３ ６ １５ － Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇ 　 　 ｙ 檲 殘檲檲檲檲殘 研究论文 殘 殘 檲 檲檲檲檲 表达抗流感病毒基因重组慢病毒滴度测定及感染效率分析 ， 胡卫杰 刘晓敏 （ ， ） 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家实验室 黑龙江哈尔滨 １５０００１ ： （ ） ， 摘 要 分别将靶向禽流感病毒 多靶点 和鸡 基因克隆到 慢病毒表达载体 采用 ＡＩＶ ｓｉＲＮＡ Ｍｘ ２０１ 　　 　 ｐ 鸡 启动子替换 慢病毒载体 启动子构建重组慢病毒载体 。并将其与辅 ａｃｔｉｎ ２０１ ＣＭＶ ２０１ Ｍｘ ｓｉＲＮＡ － ｐ ｐ － － － β β ， ， （ 助包装质粒共转染 细胞 后收集细胞上清 实时荧光定量 测定重组慢病毒 ２９３Ｔ ７２ｈ ＰＣＲ ｒＬＶＭＸ ｓｉＲ － － － ） （ ） ， 。 ＮＡ 与对照组重组慢病毒 ｒＬＶＧＦＰ ＣＴ 值 两者比较确定 ｒＬＶＭＸ ｓｉＲＮＡ滴度 ｒＬＶＭｘ ｓｉＲＮＡ 以 － － － － － （ ） ， ＭＯＩ＝４感染猪胎儿成纤维细胞 ＰＥＦ 并传代培养 提取后代细胞 ＲＮＡ检测外源基因转录以及应用间接免 。 ， ， 疫荧光试验检测鸡 Ｍｘ蛋白的表达 结果表明 ｒＬＶＭｘ ｓｉＲＮＡ浓缩后滴度与已知滴度的ｒＬＶＧＦＰ相等 － － － ８ 　 ／ ， 。 为 感染 效率 感染 的细胞传至第 代和第 代检测到外源 ２×１０ＴＵ ｍＬ ＰＥＦ ９５％ ｒＬＶＭｘ ｓｉＲＮＡ ５ １０ ＞ － －