黄连血清药物化学的LCDADMS研究.pdfVIP

黄连血清药物化学的LC/DAD/MS研究1 邓翀，王张，孟宪丽，张艺 成都中医药大学药学院，成都（611137 ） 摘 要：目的：对黄连进行血清药物化学研究。方法：采用血清药物化学研究的方法，建立 黄连及口服黄连后大鼠血清的HPLC指纹图谱，分析黄连给药后所得血清样品，鉴定口服黄 连后大鼠血中移行成分。结果：口服黄连后从血中发现了10个入血成分,10个为均为原型成 分。结论：其血清药物化学表征可以为阐明黄连药理作用机理提供依据。 关键词：黄连；血清药物化学；指纹图谱 黄连为毛莨科植物黄连Coptis chinensis Franch• 、干燥根茎, 系名贵中药材。具有泻火、 解毒、清热、燥湿的功效,其主要有效成分生物碱,具有降血糖、保护缺血心肌、抗消化性溃 疡等药理作用,临床应用广泛[1-2] 。目前尚没有发现关于单味黄连体内代谢的文献报道，故有 必要对黄连的体内代谢过程进行研究，寻找其具有生物活性的原型成分、代谢成分。中药血 清药物化学研究的最终目的是通过弄清血清中的药物成分的响应以及代谢转化成分的分析 试图找到中药的药效物质基础。因此本研究采用血清药物化学的方法研究黄连，为深入开展 黄连有效物质基础及其深层次的应用药物研发奠定基础。 1. 仪器、试药与药材 1.1 仪器与试药 LC-10ATvp 高效液相色谱仪（日本岛津株式会社）；SPD-10Avp 可见紫外检测器（日 本岛津株式会社）；AT-330 恒温箱；N-2000 色谱数据工作站（浙江大学智达信息有限公司）。 P680HPLCpump 四元泵,ASI-100Automated Sample Injector 自动进样器,DioNexDAD 检测器， API2000 质谱检测器。 乙睛:色谱纯（美国fisher试剂公司），纯净水:实验室自制，其余试剂为分析纯。对照品 （(中国药品生物制品检定所提供）；实验用药材经《2005版中国药典》要求检验合格。 1.2 实验动物 SD大鼠，150～180g，由四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所生产，实 验动物生产许可证号：SCXK （川）2004-15 。 2. 方法与结果 2.1 黄连样品的制备： 称取黄连400g加水约4000ml ，浸泡O ．5 h，煎至沸腾后微沸煎40min 。倒出药液，加水 约3200ml再煎40min 。合并药液浓缩至400ml ，浓度为g/ml 。 2.2 空白血清及含药血清样品溶液的制备 取Wister大鼠10只，随机分为空白组和给药组，给药前禁食12h，给药组以上述提取物 灌胃，给药量为为10g/kg，空白组给予等量的生理盐水。分别于给药后30min、60min、120min 股动脉取血；以3000r/min离心10min得到含药血清。分别精密吸取含药血清和空白血清各 1本课题得到国家自然科学基金项目30772764 ）的资助。 - 1 - 1.0ml至10ml塑料试管中，加2倍量乙酸乙酯萃取，然后以3000r/min离心5min 。吸取上清液， 水相再加入4倍量的甲醇，涡旋2min ，然后以3000r/min离心5min，合并上清液，在32℃水浴 条件下以氮气吹干，以50%色谱甲醇定容至0.2ml （质谱样品以50%色谱甲醇定容至1.0ml）， 即得。 2.3 色谱条件： 色谱柱ZORBAX SBC18(4.6mm×150mm，5µm)； 20mmol/L磷酸二氢钾0.2%磷酸溶液 -20mmol/十二烷基磺酸钠[乙腈：水 （3:2 ）]梯度洗脱[ 85 ∶15～60 ∶40 (0～20 m in) ，60 ∶40～ 20 ∶8