褪黑素促进小鼠玻璃化冷冻2-细胞胚胎体外发育.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第f一六届学术研讨会论文集 -- mm 褪黑素促进小鼠玻璃化冷冻2一细胞胚胎体外发育 田秀芝，王亮，高超，汪锋，徐静，卓志勇，张鲁，朱士恩，刘国世‘ 引言 褪黑素(melatonin，MT)对早期胚胎体外发育的促进作用，已在羊、猪、牛和鼠等动物的胚 胎上得到了初步验证，但是MT对冷冻后解冻的早期胚胎体外发育的作用还未见报道。为探 索MT对小鼠玻璃化冷冻的2．细胞胚胎体外发育的影响，进一步探明MT对胚胎体外发育的 作用机制。 材料与方法 “8周龄昆明白系雌鼠，超数排卵后颈椎脱臼处死，采用M2操作液由输卵管获取形态正 常的2．细胞胚胎，M2液中洗净后进行OPS冷冻。将解冻的2．细胞胚胎分别培养于含10。、10～、 lO‘一、10一、10一1、Omol／L MT的M16胚胎培养液中，并用新鲜2．细胞作对照，90．96h观察统计 囊胚率、孵化囊胚率及囊胚细胞数，检测活性氧(ROS)、细胞凋亡和囊胚上MT受体的表达情 况。 结果 lof¨～10巧mol／L vS． MT组解冻2．细胞胚胎的囊胚发育率显著高于冷冻对照组(79．79 59．61％，P0．05)，与新鲜对照组差异不显著(79．79VS．81．17％，P0．05)；囊胚细胞数10。9mol／L 组显著高于冷冻对照组(75．14 VS． VS．66．94，P0．05)，但与新鲜对照组差异不显著(75．14 增加，MT能够清除部分ROS，10。5mol／LMT组胚胎内ROS含量显著低于冷冻和新鲜对照组 (7．73VS．12．64，7．73 黑素受体mella。TUNEL检测结果表明，10’9mobLMT组凋亡囊胚的比率和平均囊胚细胞 凋亡数与新鲜对照组无显著差异(76．47vs．65．38％，3．69士1．55VS．2．82--t-0．71，P0．05)，与未添加 VS．92．86％，3．69士I．55 MT的冷冻组有显著性差异(76．47 vs．6．04士2．20，PO．05)。 讨论 M16中添加一定浓度的MT能够提高冷冻的小鼠2．细胞胚胎体外发育的能力，这与本组 结果及绵羊囊胚解冻培养的结果也是一致的[31。这种促进作用的机制可能是MT通过受体或 直接发挥抗氧化和抗凋亡的作用，清除了胚胎内的ROS，减少细胞凋亡，促进胚胎发育及其 细胞分裂，具体机制还需要进一步研究。 参考文献 1．Xiu-Zhi a1．Effectsofmelatoninoninvitro of Tian，QingWen，Jian-MinShi，et development mousetwo—cell culturedinHTF embryos medium[J]．EndocrineResearch,2010，35(1)：17·23． 2．1shizuka MuraiaL．Theef凫ctofmelatoninoninvitrofertilizationand Y K，et B，Kuribayashi in Pineal 1． embryodevelopmentmice[J]．JRes，2000，28(1)：48·5 of the 3．Abecia O．TheEffectMelatoninon Secretionof JA，ForcadaF’andZuniga