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紫外圆二色谱分析结构
根据电子跃迁能级能量的大小蛋白质的CD光谱分为三个波长范围:
(1) 250nm以下的远紫外光谱区圆二色性主要由肽键的电子跃迁引起;
(2) 250～300nm的近紫外光谱区主要由侧链芳香基团的电子跃迁引起;
(3) 300～700nm的紫外-可见光光谱区主要由蛋白质辅基等外在生色基团引起。
远紫外CD主要用于蛋白质二级结构的解析近紫外CD主要揭示蛋白质的三级结构信息紫外可见光CD主要用于辅基的偶合分析。
远紫外CD谱
在蛋白质或多肽的规则二级结构中肽键是高度有规律排列的二级结构不同的蛋白质或多肽所产生CD谱带的位置、强弱都不同。因此根据所测得蛋白质或多肽的远紫外CD谱能反映出蛋白质或多肽链二级结构的信息。
紫外区段（190-20nm），α-螺旋的CD谱在19nm附近有一正峰在208nm222nm处呈两个负特征峰β-折叠在21-218nm有一负峰，在1-200nm有一强的正峰β-转角则在 206nm附近有一正无规则卷曲构象的CD谱在198nm附近有一负峰，在220nm附近有一小而宽的正峰。
近紫外CD光谱
蛋白质中芳香氨基酸残基如色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)及二硫键处于不对称微环境时在近紫外区250～320nm表现出CD。研究表明色氨酸在290及305nm处有精细的特征峰酪氨酸在275及282nm有峰苯丙氨酸在255、260及270 nm有弱的但比较尖锐的峰带另外芳香氨基酸残基在远紫外光谱区也有CD信号二硫键于195-200nm和250-260处有谱峰。总的来说在250～280nm之间由于芳香氨酸残基的侧链的谱峰常因微区特征的不同而改变不同谱峰之间可能产生重叠。
蛋白浓度与使用的光径厚度和测量区域有一定关系，测量远紫外区氨基酸残基微环境的蛋白，浓度范围在0.1~1.0mg/ml，则光径可选择在0.1~0.2cm之间，溶液体积则在200~500ul。而测量近紫外区的蛋白三级结构，所需浓度要至少比远紫外区的，且一般光径的选择均在0.2~1.0cm，相应的体积也需增加至1~2mL缓冲液可选50~100mmol ris-HCl、PBS等，尽量除去EDTA。
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