微生物——浅析熏马肉制品中沙门氏菌检测方法.docVIP

浅析熏马肉制品中沙门氏菌的检测方法 摘要 3 1.熏马肉介绍 3 2.熏马肉制品的感官指标 3 3.熏马肉制品的理化指标 4 4.熏马肉微生物指标 4 5.熏马肉中沙门氏菌的检测 5 5.1沙门氏菌性质 5 5.2沙门氏菌的检测方法 5 5.2.1传统标准检测方法 5 5.2.2普通PCR检测方法 11 6.总结 14 致谢 15 参考文献 15 浅析熏马肉制品中沙门氏菌的检测方法 摘要：20 世纪 50 年代以来, 国内外学者进行了大量的研究, 从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法, 并在实践检验中不断取得新进展。这些方法包括酶联免疫吸附试验法、免疫磁珠法、免疫荧光标记法、噬菌体裂解试验法、核酸探针法等[3]。现对其传统标准检测方法和普通PCR检测方法作以介绍，并分析比较。 关键字：熏马肉制品 沙门氏菌 PCR检测 一、熏马肉介绍 熏马肉是新疆地方特产，是哈萨克族风味食品，色泽在自然光线下，产品表面呈褐红色、切面为粉红色风味具有熏马肠特有的香味，咸淡适中，鲜嫩可口，入口香味浓厚，回味无穷，无异味外观衣表面干燥完整，并与内容物密切结合，肠头无流油滴，无烧黑、粘液及霉斑；组织结构 紧密而坚实，有弹性，切面坚实而湿润，切片性好，无碎屑 亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)≤30mg／kg铅(以Pb计)≤1.0mg／kg砷(以As计≤0.5mg／k；苯并芘(a)≤5mg／kg净含量(用感量1／10的天平称重) 200±5)g、(300±8)g2000个／g30个／100g216个[1].。与人类疾病有关的血清型主要集中于 A~E 群，包括伤寒沙门氏菌、（甲、乙、丙型）副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等，其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及猪霍乱沙门氏菌最为常见。它不仅能导致鸡白痢、鸡伤寒、副伤寒、仔猪副伤寒等动物疾病，还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒[2]。 5.2沙门氏菌的检测方法 肉制品中沙门氏菌的检测有很多方法，这些方法包括酶联免疫吸附试验法、免疫磁珠法、免疫荧光标记法、噬菌体裂解试验法、核酸探针法等[3]。现对其传统标准检测方法和普通PCR检测方法作详细介绍。 5.2.1传统标准检测方法 传统标准检测方法，包括前增菌,选择性增菌,选择性平板分离,生化试验,血清学分型鉴定五个步骤。 5.2.1.1设备和材料 5.2.2.1.1 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 5.2.2.1.2拍击式均质器 5.2.2.1.3 电子天平：感量0.1g 5.2.2.1.4 无菌锥型瓶：容量500ml,250ml 5.2.2.1.5 微量移液器及吸管 5.2.2.1.6 无菌培养皿：直径90mm 5.2.2.1.7 无菌试管：3mm×5mm、10mm×75mm 5.2.2.1.8 无菌毛细管 5.2.2.1..9 三角烧瓶 5.2.1.2培养基和试剂 5.2.1.2.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g，NaCl 5g，Na2HPO4`12H2O 9g，KH2 PO4 1.5g,加蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三瓶，121℃，灭菌20min。 5.2.1.2.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：称取18.72g,加蒸馏水200ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管10ml，121℃，灭菌20min，此上配制的为基础液，冷却至50℃，每100ml基础液加入碘液2ml，0.1%煌绿液1ml，混匀备用。 5.2.1.2.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：称取4.6g，加蒸馏水200ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管10ml，无需高压灭菌，冷却至常温立即使用。 5.2.1.2.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：称取39.3g，加蒸馏水950ml，搅拌加热煮沸至完全溶解，无需高压灭菌，为基础液；称取8g指示剂，加水50ml，水浴50℃左右，搅拌溶解，将50ml指示剂加入950ml已冷却到50℃的基础液，混匀后立即倾注平板。 5.2.1.2.5HE（Hektoen Enteric）琼脂：称取牛肉膏5g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂 20g，加蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，无需高压灭菌，冷却到50℃，立即倾注平板。 5.2.1.2.6 三糖铁（TSI）琼脂： 5.2.1.2.7蛋白胨水、靛基质试剂： 5.2.1.2.8尿素琼脂（PH7.2）： 5.2.1.2.9氰化钾（KCN）培养基及其对照氰化钾培养基： 5.2.1.2.10赖氨酸脱羧酶试验培养基及其对照培养基： 5.2.1.2.11 甘露醇及山梨醇培养基： 5.2.1.2.11 邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基： 5.2.1.3检验程序[4] 5.2.1.3.