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第22卷第3期 广西师范大学学报(自然科学版) V01.22 No.3
2004年9月 GUANGXINORMAL
JOURNAl,OF UNIVERSITY September2004
罗汉果ISSR—PCR反应体系的建立
周俊亚,宾晓芸,彭云滔,唐绍清
(广西师范大学生命科学学院,广西桂韩541004)
摘要:以罗汉果(Siraitia DNA
聚合酶的用量以及循环次数对ISSRPCR扩增结果的影响,确立了稳定的、可重复的罗汉果ISSR最佳反应
体系和PCR扩增参数:在25
pL的PCR反应体系中,含20~50“g模板DNA,1UTaq酶,1×PCR缓冲液,
2.0 2,4种dNTPs各2005
mmol/I,MgCI pmol/I,,0pmol/I。引物;PCR扩增程序为94。C预变性3min,接着
进行40个循环:94。c变性1min,52。C退火50s,72。c延伸2min.循环结束后72。C延伸7min.
关键词:生物化学}罗汉果;ISSR;反应体系;遗传多样性
中圈分类号:Q503 文献标识码:A 文章编号:1001—6600(2004)03—008l—04
简单序列重复区间(inter—simplesequence
年创建的,是在SSR标记基础上发展起来的一种新技术.ISSR技术利用在植物基因组中常出现的SSR本
身设计引物,导致位于反向排列、间隔不太大的重复序列间的基因组片段进行PCR扩增.由于SSR在真
核生物中分布非常普遍,且串联重复的数目是可变的呈现高度多态性“j,因而ISSR—PCR可以检测基因组
中丰富的遗传变异.目前ISSR技术己用于植物品种鉴定n“。、遗传作图Is,6]、遗传多样性”“1和居群遗传
学:io]等研究中.
Je{frerexAMLuelZY
罗汉果(Siraitiagrosvenorli(Swing/e)C Zhang)是单性、雌雄异株的葫芦
极高的甜味物质是一种低热量的理想天然甜味剂[1“,是肥胖症、糖尿病患者理想的糖替代晶.它的果实还
是传统中药,用于治疗支气管炎、急慢性咽喉炎、哮喘和感冒等““.
DNA聚合酶的用量以及循环次数等都会影响
序的影响o],如模板DNA,Mg”,dNTPs,引物的浓度,Taq
ISSR的稳定性和重复性.本文以罗汉果为研究材料,对各因素的最佳反应条件进行筛选,获得了背景清
晰、可重复的扩增条带图谱,建立了适合罗汉果的ISSR反应体系,目的在于利用ISSR标记技术研究罗汉
果的遗传多样性,为罗汉果种质资源的保护和利用提供科学的依据.
1材料与方法
1.1材料
实验材料罗汉果(Siraitia
提取罗汉果叶的总DNA.
1.2 PeR反应与产物检测
PCR扩增反应在UNOⅡ48型扩增仪上进行.初始反应条件:在25pL反应体系中,50“g模板DNA,
IU t』mol/L引物;扩增程
Taq酶,1×PCR缓冲液,2.0rnmo[/I,MgCl7,4种dNTPs各200,umol/L,0.5
min,接着进行40个循环:94。c变性1min,52。C退火50s,72。C延伸2min,循
序:模板94。c预变性3
收稿日期:2004—04—02
基金项目:国家自然科学基金资助项目
965~),男.广西恭城人,广西师范大
作者简介:周俊亚(1979一),女,广西桂林人,广西师范大学硕
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