罗汉果ISSR-PCR反应体系的建立.pdfVIP

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第22卷第3期 广西师范大学学报(自然科学版) V01.22 No.3 2004年9月 GUANGXINORMAL JOURNAl,OF UNIVERSITY September2004 罗汉果ISSR—PCR反应体系的建立 周俊亚,宾晓芸,彭云滔,唐绍清 (广西师范大学生命科学学院,广西桂韩541004) 摘要:以罗汉果(Siraitia DNA 聚合酶的用量以及循环次数对ISSRPCR扩增结果的影响,确立了稳定的、可重复的罗汉果ISSR最佳反应 体系和PCR扩增参数:在25 pL的PCR反应体系中,含20~50“g模板DNA,1UTaq酶,1×PCR缓冲液, 2.0 2,4种dNTPs各2005 mmol/I,MgCI pmol/I,,0pmol/I。引物;PCR扩增程序为94。C预变性3min,接着 进行40个循环:94。c变性1min,52。C退火50s,72。c延伸2min.循环结束后72。C延伸7min. 关键词:生物化学}罗汉果;ISSR;反应体系;遗传多样性 中圈分类号:Q503 文献标识码:A 文章编号:1001—6600(2004)03—008l—04 简单序列重复区间(inter—simplesequence 年创建的,是在SSR标记基础上发展起来的一种新技术.ISSR技术利用在植物基因组中常出现的SSR本 身设计引物,导致位于反向排列、间隔不太大的重复序列间的基因组片段进行PCR扩增.由于SSR在真 核生物中分布非常普遍,且串联重复的数目是可变的呈现高度多态性“j,因而ISSR—PCR可以检测基因组 中丰富的遗传变异.目前ISSR技术己用于植物品种鉴定n“。、遗传作图Is,6]、遗传多样性”“1和居群遗传 学:io]等研究中. Je{frerexAMLuelZY 罗汉果(Siraitiagrosvenorli(Swing/e)C Zhang)是单性、雌雄异株的葫芦 极高的甜味物质是一种低热量的理想天然甜味剂[1“,是肥胖症、糖尿病患者理想的糖替代晶.它的果实还 是传统中药,用于治疗支气管炎、急慢性咽喉炎、哮喘和感冒等““. DNA聚合酶的用量以及循环次数等都会影响 序的影响o],如模板DNA,Mg”,dNTPs,引物的浓度,Taq ISSR的稳定性和重复性.本文以罗汉果为研究材料,对各因素的最佳反应条件进行筛选,获得了背景清 晰、可重复的扩增条带图谱,建立了适合罗汉果的ISSR反应体系,目的在于利用ISSR标记技术研究罗汉 果的遗传多样性,为罗汉果种质资源的保护和利用提供科学的依据. 1材料与方法 1.1材料 实验材料罗汉果(Siraitia 提取罗汉果叶的总DNA. 1.2 PeR反应与产物检测 PCR扩增反应在UNOⅡ48型扩增仪上进行.初始反应条件:在25pL反应体系中,50“g模板DNA, IU t』mol/L引物;扩增程 Taq酶,1×PCR缓冲液,2.0rnmo[/I,MgCl7,4种dNTPs各200,umol/L,0.5 min,接着进行40个循环:94。c变性1min,52。C退火50s,72。C延伸2min,循 序:模板94。c预变性3 收稿日期:2004—04—02 基金项目:国家自然科学基金资助项目 965~),男.广西恭城人,广西师范大 作者简介:周俊亚(1979一),女,广西桂林人,广西师范大学硕

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