高血压病血瘀证血管内皮细胞损伤的miRNA机制与研究.pdfVIP

第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 i RNA机制研究 高血压病血瘀证血管内皮细胞损伤的m 王铭铭1 陈利国扩方梅霞2王华强2刘红杰2 唐海兰2 1．暨南大学医学院(广州，510632)；2．暨南大学医学院(广州，510632) 血瘀证为临床常见证型，见于多种疾病。在我们过去的研究中发现n’51，高血压病血瘀证血管内皮 细胞损伤，主要与血管内皮细胞黏附分子高表达、DNA损伤、钙超载以及骨架微丝结构破坏等有关。 特异性的miRNA能调节血管内皮细胞功能瞳3等研究成果．利用Solexa(高能量测序法)和Digitalgene 压病血瘀证治疗靶点的方法及具体方向。 l材料与方法： 1．1诊断及辨证标准 高血压病诊断标准：采用《1999年世界卫生组织／国际高血压联盟关于高血压治疗指南》中高血压病 态下多次重复测得血压达到高血压病的诊断标准，并排除继发性高血压病后，即可确诊。 血瘀证诊断标准n1：①舌质紫暗或舌体瘀斑、瘀点，舌下静脉曲张瘀血；②固定性疼痛，或绞痛， 或腹痛拒按；③病理性肿块，包括内脏肿大，新生物，炎性或非炎性包块，组织增生；④血管痉挛，唇 及肢端紫绀，血栓形成，血管阻塞；⑤血不循经而停滞及出血后引起的瘀血、黑便、皮下瘀斑等，或血 性腹水；⑥月经紊乱，经期腹痛，色黑有血块，少腹急结等：⑦面部、唇、齿龈及眼周紫黑者；⑧脉涩， 或结、代，或无脉。其他依据：①肌肤甲错(皮肤粗糙、肥厚、鳞屑增多)；②肢体麻木或偏瘫；③血 液凝固性增高或纤溶活性降低；④腭黏膜征阳性(血管曲张、色紫暗)。实验室依据：①微循环障碍； ②血液流变学异常；⑨血液凝固性增高或纤溶活性降低；血小板聚集性增高或释放功能亢进；⑤血流动 力学障碍；⑥病理切片示有瘀血表现等；⑦特异性新技术显示血管阻塞。凡符合以下条件者可诊断血瘀 证：具有主要依据2项以上； 具有主要依据1项，加实验室依据2项或其他依据2项；具有其他依据2项以 上，加实验室依据1项。 1．2纳入标准 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 ①符合高血压病诊断标准；②年龄18—75岁；③高血压病限于2、3级的患者，高血压危险分层属于低 危、中危、高危；④检查前l周未服用影响血压的药物。 1．3排除标准 有严重心脑血管疾病，有严重呼吸系统疾病，有肝、肾器官功能障碍者和糖尿病者。 1．4一般资料 1．5样本采集 血瘀证组，非血瘀证组及健康组均空腹抽血。采血前患者均未使用任何药物。无菌采集前臂静脉血入 无菌带帽不抗凝干燥试管，自凝后离心，4。C2000 活30min，--20℃保存备用。 1．6实验方法 2．血瘀证相关miRNA的筛选 其中差异达显著水平的共27个(PO．01)，上调基因16个，下调基因11个；(2)血瘀证组／健康组：共 上调基因11个，下调基因13个；(3)血瘀证／非血瘀证组：共检测到差异基因411个(上调基因224个， 下调基因187个)，其中差异达显著水平的共69个(PO．01)，上调基因35个，下调基因34个。 分析显示：既在血瘀组／非血瘀组中显著差异，又在血瘀组／健康组中显著差异的miRNA有13个： 极有可能在血瘀证形成中有一定的意义。 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 3．血瘀证相关氓NA的筛选 gene 利用Digital 量。按照差异基因的筛选条件，当pO．01、FDRO．001且l 果显示： (2)健康组／ 其中差异达显著水平的共101个(P0．01，FDRO．001)，上调基因69个，下调基因32个； 共23个(PO．01，FDRO．001)，上调基因12个，下调基因11个；(3)非血瘀／血瘀组：共检测到差异基 上调基因8个，下调基因12个。 分析显示：既在血瘀组／非血瘀显著相关，也在血瘀组／健康组显著相关的mRNA有11个：THBSl重组人 异表达的基因可能在血瘀证中起重要作用。 4．整合分析差异表达的miRNA和mRNA 通过靶基因预测软件，预测差异表达的基因可能结合的Target 2)。 表l血