Am新等位基因分子遗传背景的研究.pdfVIP

· 524 · 血杂志2010年7月第23卷筮7 璺! ! 』!：垫 ： ：望：!：! · 实验研究 · Am新等位基因分子遗传背景的研究 田力 宋宁 姚志强 邓永福 罗玫 陈静娴 陈强 杨刘。 (1．中国医学科学院 北京协和医学院输血研究所，四川 成都 610081；2．眉山市中心血站) 摘要：目的 鉴定ABO新等位基因，分析Am亚型的分子基础。方法 对 1例血清学鉴定为Am亚型的标本， PCR扩增ABO等位基因的第6、7外显子及侧翼内含子，PCR产物采用直接测序和克隆测序的方法，确定其基因型。 结果 在血清学鉴定为Am亚型的标本中发现一个突变的A等位基因，它与ABO A105等位基因相比只有1个点 突变(595CT)。结论 595位突变导致编码A糖基转移酶的 199位氨基酸 由精氨酸 (Arg)转变为半胱氨酸 (Cys)，极大降低了酶的活性，表明199位氨基酸对决定ABO糖基转移酶活性是十分关键的。 关键词：ABO血型；Am亚型；糖基转移酶；分子遗传分析 中图分类号：R457．1 1 文献标识码：A 文章编号：1004-549X(2010J07-0524-03 ABO血型系统是输血和移植医学中最重要的人类同种 医学科学院输血研究所 批号，抗H血清(中国医 抗原和血型系统，常引起新生儿溶血病、溶血性输血反应和 学科学院输血研究所，批号，抗．A。(中国医学科 移植排斥反应。ABO基因位于9号染色体上，编码糖基转移 学院输血研究所，批号，反定型用试剂红细胞为 酶，该蛋白能将相应的糖基连接到H物质上，形成A或B抗 本实验室 自制。主要仪器包括：离心机 KA-2200SERO— 原。ABO基因包含7个外显子，其中第6和第 7外显子是最 MAMT1CU(日本KUBOTA)，3130基因测序仪 (美国ABI公 重要的编码序列，它们编码 ABO糖基转移酶的催化区 ’。 司)，DNAEngineDyadPCR仪 (美国Bio·Rad)。 基于对第6和第 7外显子核苷酸多态性的检测，到 目前为 1．3 血型血清学检测 血型正反定型测定参照文献 的试 止，有许多ABO新等位基因被报道，而且只有那些可导致氨 管法操作。 基酸替换的核苷酸多态性能够决定转移酶的活性和特异性， 1．4 标本 DNA提取 采用TIANampBloodDNAKit(中国 从而产生不同的ABO血型的亚型。最常见的ABO等位基 Tiangen公司)提取基因组DNA。 因包括ABO’AIO1，ABO B‘101和ABO 001，它们之间只有 1．5 ABO基因扩增 本实验室 自行设计 1对引物 (引物 少数碱基序列 的差异。ABO A‘101和ABO B101仅有7个 E67F，5一GGCTGTICTGAAGGTATIAG-3和引物 E67R，5- 核苷酸的差异，形成 4个氨基酸的替换，而 ABO ‘001与 ACGGACAAAGGAAACAGAGT一3)PCR扩增ABO基 因包含 ABOA‘101相比，只有261位单核苷酸G的缺失，并引起移 第6、7外显子、部分第5内含子、第6内含子和部分3-uTR 码突变 ，形成一条无糖基转移酶活性的多肽链 。大量 的其 基因片段在 内的共计2488bp的片段。上述引物均 由上海 它ABO等位基因都是常见的A日0等位基因通过替换、重组 英俊生物技术有限公司合成。PCR反应体系终体积25 ， 和基因转换等机制形成的 J。在许多研究报告中表明，许多 其中含 10×PCRbuffer2．5I．xl，标本DNA2p,l(约5O一1oo 弱A和弱B亚型都与ABO基因的单核酸或多核酸的突变有 ng)，LATaqDNA聚合酶 (大连 TaKaRa公 司)1U；dNTP、 关，从而导致具有催化活性的C一末端区域的氨基酸序列改 MgC12终浓度分别为0．2mmol