GPA基因突变技术及其在放射生物剂量估计中的应用.pdfVIP

维普资讯 现代预防医学2007年第34卷第 1期 ModeanPrevefiveMedicine，2007。Vo1．34。NO．I -69 · 文章编号：1003-8507(2007)01-0069-03 中田分类号：R818．Q345 文献标识码：A 【综述】 GPA基因突变技术 及其在放射生物剂量估计中的应用 李秀芹，赵进沛，任庆余，杨睿峰 国内外对急性射线照射事故和职业慢性照射者剂量估计 牛血清 白蛋 白 (BSA)、二 甲亚砜 (DMSO)、生物索 中，常因未佩戴个人剂量计。或虽佩戴但常常超出了剂量计的 (biotin)、荧光素异硫氟酸盐 (FITC)、二 甲亚胺 (DMS)等。 量程，不能快速准确地给出可靠的剂量数据，此时。利用细胞 2．2 单克隆抗体 学方法进行剂量估计就成为可靠的结果 [1】。虽然染色体畸变 GPA (M)特异性抗体 ：6A7抗体 。与 biotin结合后为 和微核已作为辐射作用后可靠的生物剂量计被应用着．但由于 6A7一B，用 Streptavidin-Phycoerythrin (Av—PE)荧光素显示 。 一 些非稳定性畸变随细胞的分裂增殖而丢失。常使检测结果随 GPA (N)特异性抗体 ：BRICm抗体 ，直接 与 HTC结合为 时间推移而改变，而且染色体只能反映本身可见的损伤。从而 BRICl∞J。 影响对辐射效应的评价 [’]。GPA (GlycophofinA)基因位点突 2．3 细胞 固定和免疫标记 变发生在造血干细胞，可以在体内传代而长期存在，属中性突 2．3．1 细胞 固定 取 O．1IIll肝素钠抗凝全血 。加入含 SDS75 变，能反映个体累积损伤 ，剂量反映曲线好，可作为终生生物 t~s／na的PBS中，1mln后用 PBS将 SDS浓度调至 10~g／ml， 剂量估计。而且 GPA分析方法具有所需血样少 。不需培养 。 并加入37％甲醛使其终浓度为3％，90mln后将甲醛浓度调至 速度快，稳定性好，重复性高等优点，因此，GPA基因突变技 10％，室温过夜 固定 。用洗涤缓冲液 (1mg／mlBsA，0．01％ 术作为放射生物剂量估计一直被广泛应用着 [3-7]。现就 ∞ ～ NP-40和 1．5mmol／LNaN3)洗涤红细胞 ，将细胞悬浮于 1IIll 基因突变研究方法及其在放射生物剂量估计中的应用做一综 洗涤液中，细胞终浓度为 5xl0s个／ml备用。 述。 2．3．2 免疫标记 室温下取固定好的细胞液 O．15IIll。离心洗 涤 ，悬浮于3IIll染色液中，加入 1 g／IIll6A7一B和2~g／ml 1 G队 基因突变技术的基本原理 BRIC156一F，在暗中旋转振荡 ，洗涤，悬浮于含有 10 IIll GPA是人类红细胞表面主要的血型糖蛋 白，每个红细胞上 的碘化丙啶 (PI)的染色缓冲液 中。 约有 6xl 个拷贝 …，每个拷贝古 131个氨基酸 。GPA有 M 2．4 流式细胞仪计数 和N两种形式 ，GPA (M)在N端第 1位是丝氨酸，第5位是 用激光流式细胞计数仪进行分析，每个细胞测4个参数： 甘氨酸；帆 ～(N)在相应位置是亮氨酸和谷氨酸。GPA等位 前向光散射，侧向散射，荧光素的荧光波长和藻红蛋 白的荧光 基因突变可产生 4种变异细胞 ，杂合子型 M NP‘和纯合子 波长，对数放大。细胞的分析速度约为3000～5000个细胞／s。 MM、NN。MN血型个体在人群中的分布杂合子型和纯合子型 分析5xl06个细胞大约30r