人胆固醇酯转运蛋白的cDNA克隆、原核表达及抗血清制备__百替生物.pdfVIP

cDNA cDNA 人胆固醇酯转运蛋白的ccDDNNAA克隆、 原核表达及抗血清制备 作者：刘惠荣 作者单位：内蒙古农业大学生物工程学院, 内蒙古 呼和浩特 010018; 【摘要】 目的: 克隆人胆固醇酯转运蛋白（CETP） cDNA 序列, 利用大肠杆菌表达人CETP, 制备 兔抗人CETP 的多克隆抗血清。方法: 采用RT PCR 方法, 将人CETP 基因克隆到pET 30b(+)上, 构建CETP 原核表达载体并转化大肠杆菌, IPTG 诱导表达, 切胶纯化蛋白后免疫家兔, 制备CETP 抗 血清, 以 ELISA 、 Western blot 、 细胞免疫荧光方法对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果: SDS PAGE 分析表明, 经IPTG 诱导, CETP 基因在大肠杆菌BL21(DE3)的包涵体中高效表达, 最佳 诱导表达时间为4 h。将切胶纯化的蛋白免疫家兔, ELISA 法测定的抗血清效价为1∶5.12×105。Western blo