突托蜡梅ISSR引物反应条件的优化与筛选.pdfVIP

武汉植物学研究 2008, 26 ( 3) : 245 ～250 J ou rn a l of W u h an B o tan ica l R esea rch 突托蜡梅 ISSR 引物反应条件的优化与筛选 1 1 1 2 1 李 艳 , 江玉梅 , 鲁顺保 , 彭九生 , 朱 笃 ( 1. 江西师范大学生命科学学院 /江西省亚热带植物资源保护与利用重点实验室 , 南昌　330022; 2. 江西省林业科学院 , 南昌　330032) ( ) 摘 　要 : 为从突托蜡梅 Ch im onan thus g ramm a tus 叶片中提取高质量的总 DNA , 比较了 CTAB 法 、改良的 CTAB 法 、 SD S法 、高盐低 pH 值法 、SD SCTAB 法 、SD S蛋白酶 K法 。结果表明:改良的 CTAB 是提取突托蜡梅基因组 DNA 的 ( ) μ ( 有效方法 。以 U 811 GA 8 C 为引物 ,确立 了适合突托蜡梅 的 ISSR 反应体系 : 在 20 L 反应体系 50 ng DNA、 μ 2 + ) 06 mo l/L引物 、15 mmol/L M g 、015 mmol/L dN TP s、20 U Taq DNA 聚合酶 中 , 反应程序为 : 94 ℃预变性 5 m in、94 ℃变性 1 m in、572 ℃退火 45 s、72 ℃延伸 2 m in,循环 40次 ,最后于 72 ℃延伸 5 m in。用来 自不同居群的 7 个个体 , 以 100个 ISSR 引物进行 PCR 扩增 ,筛选出了扩增效果较好的 10个引物 ,得到了 74个位点 ,其中 39个为多 态位点 ,多态性位点比例为 52 7% 。 关键词 : 突托蜡梅 ; DNA 提取 ; ISSR; 引物筛选 中图分类号 : Q75　　　　　文献标识码 : A 　　　　　文章编号 : 1000470X (2008) O ptim iza tion of Exper im en t Cond ition s and Pr im er Screen ing w ith ISSR M arker s for C h im on an th u s g ramm a tu s 1 1 1 2 1 L I Yan , J IAN G YuM ei , LU ShunB ao , PEN G J iuSheng , ZHU Du ( 1. Colleg e of L if e S ciences J iangx i N orm a l Un iversity /J iangx i P rovinca l Key L ab of P rotection and U tiliza tion of S ubtrop ica l