考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究_王孝平.pdfVIP

第 卷第 期 天 津 化 工 23 3 Vol．23 No．3 年 月 2009 5 Tianjin Chemical Industry May.2009 考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究 王孝平，邢树礼 （青岛科技大学药学系，山东 青岛 266042 ） 摘要：采用考马斯亮蓝G-250 染色法对蛋白质含量进行了测定，建立了快速、灵敏的检测蛋白质的方法。 结果表明，考马斯亮蓝G-250 染色法简单、迅速，且相对较为准确，是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。 关键词：蛋白质；考马斯亮蓝；含量测定 中图分类号： 文献标志码： 文章编号： （ ） R927.2 A 1008－1267 2009 03-0040-03 在许多蛋白质研究的领域中，用一种快速准确 平时应将该标准液放在-20℃ 的环境中储存。 的方法来检测蛋白浓度是必不可少的。 一种新建立 1.3 塑胶制品及玻璃制品 的考马斯亮蓝法在许多实验中已成为首选方法用 在利用分光光度计测量吸光度时， 所用的比色 来定量的检测蛋白浓度。与传统的Lowry 法相比，该 皿应该是塑料的或玻璃的，并且用之前应绝对保证清 法更易操作，更快，更灵敏，此外，它受其他一些试 洗干洁，禁止使用石英（成分为二氧化硅）比色皿，因 [3] 剂和非蛋白成分干扰也较小。 为染料会跟二氧化硅发生共价结合 ，而染料粘到玻 该考马斯亮蓝法其检测原理是基于染料考马 璃或塑料比色皿上时，可以用甲醇或洗涤剂清洗掉。 斯蓝G250 和蛋白质之间形成的特异性结合。 详细 2 方法 [1] 的研究表明 ，该染料可以自由存在于四种不同的 2.1 标准测定方法 离子形式中。 相比之下，染料更多的阴离子形式与 2.1.1 在小试管中依次按梯度加入 100 μL 中含10 蛋白质结合且结合后显蓝色， 在590 nm 左右具有 到 100 μg 蛋白质。 如果近似样本浓度是未知，可以 最大吸收。 因此通过定量测定染料的蓝色离子的量 测定一系列稀释品（如 ， ， ， ）。 准备 1 1:10 1:100 1:1000 就可以算出蛋白质的量， 这通常可以在595 nm 处 重复每个样品。 测定吸光度获得。 为校正曲线， 取体积为 ， ， ， ， 和 2.1.2 10 20 40 60 80 这种染料最容易与蛋白质中的精氨酰和赖氨