黄花苜蓿愈伤组织诱导及分化培养条件研究.pdfVIP

黄花苜蓿愈伤组织诱导及分化培养条件的研究 ∗ 伊风艳 石凤翎 展春芳 姜圆圆 ( 内蒙古农业大学生态环境学院 010019) 摘要：以内蒙古锡林浩特野生黄花苜蓿子叶和下胚轴为外植体，研究不同激素配比对黄花苜 蓿愈伤组织诱导及分化的影响，结果表明：MS+2,4-D2mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖 3%+琼脂 0.7%为适宜的愈伤组织诱导培养基；MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖 2%+琼脂 0.7%为适 宜的分化培养基；生根培养基为：1/2MS+ NAA 0.1mg/L+蔗糖 2%+琼脂 0.7% 。下胚轴是诱 导愈伤及分化的最佳外植体，诱导率 100%，分化率可达 80%。 关键词：黄花苜蓿 愈伤组织 诱导率 分化率 中图分类号: S567. 2 文献标志码: A [1] 黄花苜蓿(Medicago falcata L.)是一种重要的野生豆科牧草，在我国有着广泛的分布 ， 与紫花苜蓿相比，它具有抗逆性强，尤其是耐寒、抗病虫害等特点，在我国干旱、寒冷的地 方推广种植，发挥着重要的生态价值及经济价值[2] 。同时，黄花苜蓿还是培育优良紫花苜蓿 的重要抗性基因源。 随着分子生物学和植物基因工程的发展，人们借助生物技术手段建立高频、高繁、高效 的苜蓿再生体系，已经成为苜蓿品种改良的重要途径。苜蓿组培体系建立的研究在豆科牧草 中相对较多[3-8] ，但也存在很多问题，如苜蓿愈伤分化率偏低，组织培养体系不完善，不能 满足苜蓿进行高效遗传转化研究的需要，因此限制了转基因技术在提高苜蓿产量、改善品质 等方面的应用。本试验在众多研究的基础上，通过研究不同外源激素对黄花苜蓿 2 种外植体 愈伤组织的诱导、芽分化的影响，利用组织培养技术在短期内获得大量愈伤组织和再生苗， 为苜蓿的转基因技术提供条件，对推进以组织培养技术为基础的苜蓿遗传转化工程的发展具 有重要意义。 1材料与方法 1.1试验材料 野生黄花苜蓿种子，2009 年采集于锡林浩特毛登牧场，保存在 4～10℃种子柜中。 1.2试验方法 1.2.1无菌苗培养 选取饱满有光泽的黄花苜蓿种子，用砂纸打磨之后，在流水条件下冲洗 20min ，无菌滤 纸吸干后，用 70%酒精漂洗 30s，0.1%氯化汞溶液消毒 8min，无菌水冲洗4～6 次，灭菌后 ∗通讯作者，E-mail ：sfl0000@126.com 收稿日期： 基金项目：国家科技部 863 计划项目（2009AA10Z108 ）；内蒙古科技厅社会发展领域科技计划项目）。 作者简介：伊风艳（1984-），女（汉族），内蒙古通辽人，在读博士，研究方向为牧草遗传育种与种业科学，E-mail ：yifengyan88@ 。 将种子接种到 MS 固体培养基上，每三角瓶接 30 粒，在室内散射光条件下培养。 1.2.2愈伤组织的诱导 取发芽 8d 左右的无菌苗的子叶和下胚轴，将子叶切割成 4mm ×4mm 的小块、下胚轴 切割约 4mm 的小段，接种于附加不同浓度的 2,4-D 和 6-BA 的固体基本培养基(MS)上(表 1)， 其中蔗糖 3.0%，琼脂 0.7%，pH 值为 5.89～5.92，在 19～25 ℃室内散射光条件下培养，3 周 后进行数据统计。对于未完全形成愈伤的外植体进行继代培养。 表 1 黄花苜蓿愈伤组织诱导培养基激素种类与用量 Table 1 The hormone types and dosage of Medicago falcata L. callus induction medium 激素种类 激素浓度 Hormone types Hormone concentration(mg/L) A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 A12 2,4-D