吉泰SNP检测讲义.pdfVIP

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2015-07-24 发布于云南
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吉泰SNP检测讲义.pdf

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SNP 分析技术 SNP 分析技术吉泰生物仪器部: 徐宗怡 2007年春 • SNP是什么？ • SNP研究意义 • Genotyping分析技术 Taqman技术 HRM 高分辨熔点技术 Microarray芯片技术 • 总结 • Genome Variations 基因组变异 • 99.9%相同，3百万变异 1/1000～1200 DNA base pair (bp) 分布存在“hot spots”和”stable” • mutation 突变 polymorphism 多态性 • SNP=single nucleotide polymorphism 突变多态性～10% ～90% • 基因内部SNP 外显子：可改变编码氨基酸序列内含子：可改变外显子的剪接方式 • 基因外部调控区SNP 可影响基因转录 • 其他区域SNP 在疾病易感区域定位时提供遗传标记 SNP研究意义 SNP研究意义 • 寻找疾病相关的突变位点，发展疾病预防策略。 • 通过对药物靶点个体差异性分析，个性化药物、方法治疗。 • 法医学研究 • 器官移植中供体/受体配对分析 SNP genotyping 分析技术 SNP genotyping 分析技术 • 多达百余种测序技术限制性内切酶技术质谱分析技术 Taqman技术 HRM (High Resolution Melting) 高分辨熔点分析变性高效液相色谱技术 Pyrosequencing技术 Microarray芯片技术 … Taqman技术 Taqman技术 Taqman技术 Taqman技术 Taqman技术 Taqman技术依据其荧光值可进行基因分型 HRM技术 HRM技术原理：在一定的温度范围内将PCR扩增产物进行变性，期间实时检测体系内荧光信号。荧光值随着温度变化，可绘制熔解曲线。根据曲线准确区分野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子。 HRM技术 HRM技术野生型纯合子突变型纯合子杂合子 HRM技术 HRM技术特点：简单、快速、省钱、高灵敏度。系统组成： LC Green Plus染料 LightScanner仪器 HR-1仪器 HRM技术 HRM技术 LC Green Plus 染料 SYBR Green dye •非饱和型染料 •对PCR有抑制 •倾向于高Tm产物 LC Green dye •饱和型染料