制备绒毛细胞染色体的研究AStudyofChromosomePreparationformChorionicVillus.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)18(5):39-421996 制备绒毛细胞染色体的研究① 辜士扬 李蒙茹 张秀玲 天（津医科大学总医院，天津300052) 摘 要 在以往工作的基础上，建立了制备绒毛细胞染色体的24小时培养并结合酶解的方法．主要特点 是将解离细胞、低渗处理与秋水仙素处理合并为一个步骤．用这种方法能使绒毛细胞染色体的制作成功 率明显提高，并对研究内容进行了讨论． 关键词 孕早期诊断，绒毛 AStudyofChromosomePreparationfromChorionicVillus GuShiyang LiMengru ZhangXiuling (TianjinMedicalUniversityHospital,Tianjin300052) AbstractAstudyofenzymolysisforchromosomepreparationfromchorionicvilluswasestablishedupon previouswork.Essentialfeatureofthistechniquewastomergecellseparationfromthecytotrophoblastic layer,treatmentwithhypotonicsolutionandcolchicinetreatmentintoonestep.Thistechnique significantlyimprovedthesuccessrateofchromosomeanalysisfromCVS.Theresultsofthestudywere discussed. Keywords Firsttrimesterprenataldiagnosis,Chorionicvillus Simoni等 ”〔，所建立的孕早期直接制备绒毛细胞染色体的方法，是产前诊断方法学上的突破．之后，国内 外产前诊断工作者不断努力，使制片效果逐步提高 ’一〔 ，7‘,9-12,14,16)。为了保证孕早期诊断的准确性，我们对孕 早期绒毛细胞短期培养和酶解法制备染色体进行了研究，并取得良好效果． 1材 料 和 方 法 1.1材料 用599例人工流产的绒毛标本探索主要步骤的最佳处理条件并建立方法．用40例孕龄为40-70天的盲吸标 本验证．标本取出后立即投人D-Hanks中漂洗． 1.2制备G带的步骤 1.2.1将经D-Hanks漂洗后的标本投人培养液 R（PMI1640+5%小牛血清十2mmol/L谷氨酞胺十抗菌素）， 37℃恒温箱培养24小时． 1.2.2将标本转人含下列成分的溶液中，在37℃下处理35分钟。每隔10分钟将标本悬浮一次．(1)0.4%氯化 钾+0.4 拘橡酸钠 2（：5)5m1;(2)EDTA-胰蛋白酶液0.05m1;(3)0.6％胶原酶溶液0.25m1;(4）秋水仙素 终（浓度为1.5pg/ml). 1.2.3加人lml甲醇冰醋酸 (3：1)固定液固定． ①南开大学生物系遗传教研室杜荣赛主任热情协助原始数据的统计学处理，谨此致谢． 40 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1996 18卷 1.2.4离心 （1500转 ／分）10分钟． 1.2.5弃去上清液，加人5m1固定液，10分钟后吹打标本． 1.2.6离心10分钟，换固定液一次，至少固定 1小时． 1.2.7挑出绒毛枝后离心． 1.2.8将适量的细胞悬液按常规滴片，置80℃烤箱 1.5小时． 1.2.90.005%胰蛋白酶液处理6-8分钟，Giemsa染色． 2结 果 与 讨 论 本文40例盲吸标本全部显带。每例可计数分裂相达31个以上者占87.5% (35/40)，显带效果良好的在6 个分裂相以上者占90% (36/40). 图1用本法制备的绒毛细胞染色体a（内复制；b，多倍体） 经40例盲吸标本验证，说明24小时培养并结合酶解法能获得 良好的制片与显带效果 图（1)。表 1及表2 是这两个指标与本室的TSG法 z〔〕的比较，均有显著差异 (P（0.001).