双启动子双报告基因真核表达质粒的构建及表达_高明珠_朱瑞宇_陈蕴_金坚.pdfVIP

网络出版时间：2012-05-29 17:05 网络出版地址：/kcms/detail/22.1197.Q1705.001.html 中国生物制品学杂志 Chin J Biologicals 员 · · 基础研究 双启动子双报告基因真核表达质粒的构建及表达 明珠，朱瑞宇，陈蕴，金坚 ， 。 【摘要 】 目的 构建双启动子双报告基因真核表达质粒 并在293T 细胞内进行表达 方法 分别以pEGFP N1 和pDsRed N1 ， ， ， 为模板 PCR 扩增 EGFP 和DsRed 基因 插入表达载体pCI 分别构建重组表达质粒pCI EGFP 和pCI DsRed ，利用载体上Bgl 域 ， ， 和 BamH 玉为同尾酶的特点 将两个表达质粒酶切后拼接 构建双启动子双报告基因重组真核表达质粒 pCI cmvDsRed ， ， cmvEGFP，转染 293T 细胞 荧光显微镜观察 EGFP 和DsRed 的表达 Western blot 和流式细胞术检测EGFP 和DsRed 蛋白的表 ， ； 达。结果 重组真核表达质粒pCI cmv DsRed cmvEGFP 经酶切鉴定和测序证实构建正确 两启动子为顺向相连 EGFP 和DsRed 。 ， ， 蛋白在293T 细胞中可同时正确表达 结论 成功构建了双启动子双报告基因真核表达质粒 并在293T 细胞 表达 为实现两 种外源基因在真核细胞内的同步表达及示踪提供了有效的分子工具。 】 基因， ；基因表达 【关键词 启动子； 报告；真核细胞 【中国图书分类号】Q782 【文献标识码】A 【文章编号】1004 5503（201圆 ） Construction and expression of eukaryotic plasmid with dual鄄promoters and dual鄄reporter genes GAO Ming zhu，ZHU Rui yu ，CHEN Yun，J IN Jian （Sc hool of Medic ine and Pharmaceutics ，Jiangnan Unive rs ity， W uxi 214122 ，Jiangsu Prov ince ，China） 【Abstract 】 Obj ective To construct a eukaryotic plasmid with dual promoters and dual reporter genes ，and exp