固态发酵黑曲霉产单宁酶发酵条件研究.pdfVIP

固态发酵黑曲霉产单宁酶发酵条件研究 保玉心1’2“，邱树毅1’2，李秧针1’2，黄永光1，2’3 2(贵州大学化工学院，贵州贵阳，550003) 1(贵州省发酵工程与生物制药重点实验室，贵州贵阳，550003) 3(贵州大学生命科学学院，贵州花溪，550025) 摘 要 经紫外线诱变黑曲霉菌株筛选出1株高产单宁酶的黑曲霉B0201，利用五倍子为诱导物，固态发酵该 菌株得到的单宁酶活力有较大提高。单因素优化试验表明，五倍子用量为8％，初始水分含量为50％，初始 pH6．0，温度30C为优化产酶条件。在优化的条件下，培养96h后产单宁酶酶活力达到了58．2U／g(干基)。因 此，黑曲霉固态发酵产单宁酶具有很大的研究意义及广阔的应用前景。 关键词 黑曲霉，单宁酶，固态发酵 单宁酶属于诱导酶，主要利用微生物通过液态和 仪器和试剂：UV2550紫外可见分光光度计；恒 固态发酵生产，液态发酵所产酶酶活力较低，产量少。 温培养箱。 Lekha[1]在对黑曲霉DKLl04进行液态表层发酵、液没食子酸丙酯：购于湖南省张家界贸源化工有限 态深层发酵和固态发酵比较实验时发现，黑曲霉固态 公司；绕单宁：购于上海君创化工有限公司；五倍子： 发酵所产的单宁酶几乎全部都是胞外酶，而且比液态 购于贵州省遵义市余庆县。 发酵在缩短一半培养时间的同时，酶产量可分别提高 1．2固态发酵方法 1．8倍和2．5倍，但胞外酶活力难检测，因此国内研 称取5 mL三 g单宁酸和麸皮的混合物置于250 究者都采用液态发酵法生产，所得到的胞内单宁酶活 性都较低。Sabu[23等利用罗望子果实、棕榈果仁作 无机盐混合溶液5mL，用玻璃棒将发酵底物搅拌均 为培养基基础，进行固态发酵黑曲霉产单宁酶的研 匀，1×105Pa灭菌20min，冷却后接种人1mL孢子 究，酶活力最高仅为12．7 U／g(干基)。Trevino- Cueto[33等用富含单宁酸的沙漠植物作为培养基对黑 h。 静置培养96 曲霉进行固态发酵所得到的酶活力为9．2 U／g(干 1．3粗酶液提取 基)。RakeshKumar[4]等利用乌墨树叶作为固态发 取出培养96h的三角瓶，在三角瓶中加入50 酵培养基基础，对红曲霉菌株进行发酵，得到的单宁 mL 5．0的柠檬酸缓冲液，30℃，180r／rain振荡 pH 酶活力最高为60 U／g(干基)。本论文在解决了胞外 浸提1h，用定性滤纸过滤即得粗酶液。 酶活检测方法后，采用富含单宁酸的五倍子作为添加 1．4酶活检测方法 在培养基中的诱导物，对黑曲霉固态发酵产单宁酶进 将30℃下每分钟产生1弘m01没食子酸所需的 行了研究，并对发酵过程中的各个参数以及培养基的 酶量定义为1个酶活单位。取3支洁净的试管分别 各