2013浙科版选修1第二部分《实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》ppt课件8.pptVIP

* * * 一 、酶的生产 ①提取法 定义：采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来 缺点： 要有充足的原材料，广泛应用受到限制 ③发酵法——常用方法 定义：通过微生物发酵获得所需要的酶。 优点： 易培养、繁殖速度快、便于大规模生产。 ②化学合成法 缺点： 成本高、已知分子结构的酶 二 、酶在应用过程中存在的问题 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量，难以在工业生产中广泛应用 针对酶的特点，如何在生产实践中加以应用？ 固定化酶：将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 类型 优点 不足 直接使用酶 催化效率高，低耗能、低污染等 对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量 固定化酶 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的 直接使用酶和固定化酶的优缺点 三、 酶的固定化方法 1、物理吸附法： 将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性碳、多孔玻璃等 2、包埋法： 将酶包裹在多孔的载体中，包埋成格子型或包埋成微胶囊型 3、化学结合法： 将酶分子相互结合，或将其结合到纤维素、琼脂糖，离子交换树脂等载体上的固定方式 交联法和共价偶联法 酶 物理吸附法 交联法 包埋法 酶的固定化方法 共价偶联法 实验原理：本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成 淀粉 α-淀粉酶 糊精 B—淀粉酶 葡萄糖 糖化淀粉酶 麦芽糖 这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为 50~75℃；最适PH为5.5~7.5 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 四、“α-淀粉酶固定化”实验 实验目的：1、制备固定化的α-淀粉酶 2、检测固定化α-淀粉酶的效果 设备及用品：5ml塑料注射器 50ml烧杯 滴管 自行车用气门心及夹子 注射器架 试管及微量离心管3支 实验材料: 1、a-淀粉酶的固定化：在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。由于酶不纯，可能有些不溶物。再加入5g石英砂，不时搅拌，30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml)。用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器，流速为1ml/min。 2、可溶性淀粉溶液：取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。 3、5mmol/L KI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中。 除去未吸附的游离淀粉酶 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 蒸馏水 实验步骤: 1、将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱。 2、在流出5ml后接收0.5ml流出液，加入1~2滴KI-I2溶液，观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 淀粉 2、实验后，用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱，放置在4℃冰箱中，几天后再重复上述实验，看是否有相同的结果。 课后练习 1、如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶? 2、耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。 可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。 1、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（ ） A、温度 B、PH C、水分 D、营养 D 练习 2、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自 A、化学合成 B、动物体内 C、植物体内 D、微生物体内 D 3.酶的固定方法不包括( )。 A. 将酶吸附在固体表面上 B．将酶相互连接起来 C．将酶包埋在细微网格里 D．将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶 D 5. 关于固定化酶的叙述不正确的是 (