牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定.doc

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离和鉴定 肖丽 王进 （武汉大学化学与分子科学学院，2001级 化学基地班 ） 摘要：本文用实验的方法分离出牛奶的主要组成物质酪蛋白和乳糖，并用其特征反应和化学特性定性定量地检验了所分离的产物。 关键词：酪蛋白，乳糖，等电点，纸电泳，分离。 1 引言 牛奶是一种营养价值丰富且易被人体吸收的物质。现代研究表明，牛奶中所含的水，蛋白质，脂肪，糖，无机盐，维生素等都容易被人体吸收利用，除具有较高的营养价值外，对一些疾病还有一定治疗作用和保健养老作用。 酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以钙盐存在。酪蛋白是两性化合物，当调节牛奶的pH值到酪蛋白的等电点（pH=4.8）时，酪蛋白呈电中性，这时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来。本实验利用酪蛋白的这种性质对其进行分离。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，因此分离后用乙醇和乙醚洗去其中残留的脂肪。 牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种还原性二糖，是目前唯一由哺乳动物合成的糖，以α-乳糖和β－乳糖两种同分异构体存在，在水溶液中两种乳糖可以相互转化，故水溶液有变旋光现象。乳糖不溶于乙醇，本实验使用乙醇使它结晶，达到分离目的。 2 实验部分 2.1 原料和仪器 50 ml烧杯, 100 ml量筒，数字旋光异仪，蒸发皿，水浴锅，电泳仪，精密PH试纸，简单抽滤装置。 冰HAc，95%乙醇，新鲜牛奶（伊利牌），碳酸钙，乙醚，考马斯亮蓝试剂，硫酸铜，氢氧化钠。 2.2 分离实验 （1）酪蛋白的分离： 步骤：取20ml新鲜牛奶于50ml烧杯中，在恒温水浴中加热到50oC，不断搅拌下滴加10%HAc,用精密PH试纸调节牛奶的PH值至4.6~4.8（理论等电点pH=4.8，此步操作见后讨论），空气中放置一段时间冷却，之后过滤出其中的酪蛋白（滤液中加少量碳酸钙，留做下部实验用），依次用乙醇，乙醇和乙醚等体积混合液，乙醚洗涤酪蛋白，除去其中的脂肪，将其转入到表面皿上，在空气中风干后称重，得酪蛋白1.4218 g。 现象：在温水浴中调节到pH=4.6左右后，溶液逐渐变成乳白色悬浊液，冷却之后沉淀分层，上层为淡青色澄清溶液，下层为乳白色沉淀。抽滤时速度 较快，加入洗涤剂洗涤后，将固体放在空气中风干，得到乳白偏黄的酪蛋白颗粒 ，较硬，难以用玻棒捣碎。 (2) 乳糖的分离： 步骤：将上部实验加入碳酸钙的滤液放入蒸发皿中，用蒸气浴浓缩至3ml，稍冷后在热液中加约18ml乙醇，加热使之混合均匀，过滤除去其中的蛋白质和碳酸钙，把滤液转入到锥形瓶中，加塞，放置1－2天，让乳糖结晶，过滤，分离其中的乳糖，用冷的95％乙醇洗涤，干燥称重，得乳糖0.6132克。 现象：用蒸气浴浓缩过程中，蒸发皿壁上有少许晶体析出。 最终产物为白色粉末晶状物质。 2.3 性质实验 （1）酪蛋白的鉴定： 将少量酪蛋白溶解于水中，进行以下反应: 缩二脲反应： 紫玫瑰色 取少量酪蛋白溶液于试管中，加入15－20滴10％的氢氧化钠溶液，混匀后加入3－5滴5％的硫酸铜溶液，摇动，有紫色出现。 浓硝酸反应（蛋白质反应）： 在试管中加入1ml酪蛋白溶液，加入4滴浓硝酸，出现白色沉淀。将试管至水浴中加热，沉淀变黄，冷却后滴加10％氢氧化钠溶液，黄色变为更深的橙黄色。 （2）乳糖的变旋光测定： 本实验因为旋光仪存在仪器故障，故其实验结果并没有多少理论研究意义，在这里不与详细说明。 （3）酪蛋白的电泳实验： 步骤：在长方形纸的中间划一条横线，在其两端标明正负级，把纸两端分别放进电泳池的两个槽中，当液面上升到离中心线约1cm时，用溶解的酪蛋白溶液在中心点一个点，放入电泳仪中，调节仪器的电压为160V，电流为3mA，盖上盖子。约40分钟后，取出纸片，用吹风机吹干，用显色剂考马斯亮蓝试剂对其显色。 现象：电泳纸上，负极方向离中心位置不远的地方有一白圈，其余位置都为蓝色，在用标准试样做出的纸上，现象亦不明显。实验现象不能说明三种酪蛋白的分离，其讨论见后。 3 结果讨论 3.1分离过程条件的影响 3.1.1 pH值的影响（主要） （1）pH值对酪蛋白沉淀的影响： 酪蛋白的等电点理论上为pH=4.8但实验中，当加入的醋酸使牛奶的pH=4.8时，溶液并未出现明显的块状固体出现，仅是有乳浊现象出现。第一次实验中，用此进行抽滤，由于粉末状的乳浊物堵住了滤纸，使其抽滤速度很慢，几个小时后仍未抽完，实验失败。第2次实验，调节PH?值oC升到45oC和55oC时，酪蛋白凝结最大速率分别以8.5×10￣3s￣1增加到17.7×10￣3 s￣1和18.9×10￣3 s￣1,与45oC和55oC相比，在35oC