牛膝多糖刺激的DC联合CIK细胞对SW480的杀伤作用研究.doc

牛膝多糖刺激的DC联合CIK细胞对SW480的杀伤作用研究 本文档由【中文word文档库】提供，转载分发敬请保留本信息； 中文word文档库免费提供海量范文、教育、学习、政策、报告和经济类word文档。 一、立项的背景和意义 牛膝（Achyranthes bidentata Blume）的干燥根是一种历史悠久的中药药材，始载《神农本草经》，列为上品，中医学认为有活血祛瘀，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行，泻火解毒的功效。牛膝多糖（Achyranthes bidentata polysaccharides, APBS）是从牛膝根中分离提取得到的一种小分子水溶性多糖化合物。近年来有研究发现，牛膝多糖在抗肿瘤免疫中具有重要的调节作用，对多种抗免疫活性细胞的功能有着重要的影响。牛膝多糖对在抗肿瘤免疫中起着极其重要作用的树突状细胞（dendritic cells, DC）的功能有显著影响，牛膝多糖对DC细胞因子的分泌及DC对同种T细胞的刺激能力具有一定的促进作用。但是，关于牛膝多糖刺激的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killers,CIK）对结肠癌细胞株SW480的杀伤作用的影响则未见报道。 树突状细胞（dendritic cells, DC）是体内唯一能激活na?ve T 细胞的一种抗原递呈细胞（antigen presenting cells, APC），是机体特异性免疫应答的始动者，也是讫今所知的体内抗原递呈功能最强的APC，因其成熟时伸出树突状突起而得名。未成熟DC高表达IgG Fc受体、C3b受体、甘露糖受体和某些Toll样受体，低表达MHCⅠ/Ⅱ类分子，它们摄取、加工处理抗原的能力强，而递呈抗原激发免疫应答的能力弱。成熟DC高表达MHCⅠ/Ⅱ类分子和CD54、CD40、CD80、CD86等共刺激分子及黏附分子，它们摄取、加工处理抗原的能力弱，而递呈抗原、启动免疫应答的能力强。 既往研究认为，恶性肿瘤的发生和发展与机体的免疫状态密切相关，随着对抗原递呈和免疫识别的研究进展，对树突状细胞（DC）在免疫反应中所起中心作用的认识的加深，认为DC作为功能最强的专职的抗原递呈细胞，在体外制备负载肿瘤抗原的肿瘤特异性DC肿瘤疫苗，可以激发机体主动性抗肿瘤免疫反应，是具有良好前景的生物治疗方案。故以DC为基础进行肿瘤疫苗的设计与应用已成为近年来肿瘤免疫治疗的研究热点。 细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killers,CIK）是由IFN-r、CD3单抗及IL-2等细胞因子在体外刺激外周血单个核细胞而诱生出的具有非特异性细胞毒作用的效应细胞。在现今发现的所有免疫效应细胞中，CIK细胞具有较强的增殖能力和较强的细胞毒活性，在肿瘤免疫治疗中显示了巨大的应用前景。具有非MHC限制性且CIK细胞是新一代过继免疫治疗的首选方案。 但目前临床无论是DC瘤苗还是CIK细胞单独应用于抗肿瘤治疗，效果都不是特别理想，都存在欠缺。如果把牛膝多糖刺激的DC与CIK细胞联合起来应用治疗肿瘤，用DC来增强CIK细胞的抗肿瘤应答，而用CIK细胞的非MHC限制性来弥补DC的MHC限制性的不足，从而达到更好的抗肿瘤效果，提高肿瘤病人的长期生存率和生活质量。基于上述原理，我们通过牛膝多糖刺激和肿瘤抗原致敏的DC与CIK细胞联合应用观察其对结肠癌细胞株SW480的抗肿瘤作用效果，同时检测在杀伤试验中相关细胞因子的分泌水平，以探讨DC与CIK细胞相互作用的一些可能机制。探索中药干预的肿瘤过继免疫治疗的新途径。 二、国内外研究现状和发展趋势 （一）关于牛膝多糖（APBS）与机体免疫功能关系的研究现状： 1 免疫调节功能 1.1　对单核细胞的影响 宁勇等[1]用不同浓度的牛膝多糖对体外培养外周血单核细胞进行诱导培养12h，结果牛膝多糖能增强单核细胞的吞噬作用，增加单核细胞胞质内溶酶体量，显著诱导单核细胞表达TNF-α和IL-6。证明牛膝多糖对单核细胞具有激活作用。王宇学等[2]用贴壁法分离培养外周血单核细胞并鉴定以及用流式细胞术检测单核细胞HLA-DRα表面分子表达水平。提示ABPS能诱导单核细胞胞浆溶酶体和胞浆量增多、吞噬能力增强，但没有增殖能力；同时上调单核细胞HLA-DRα表面分子的表达。说明ABPS能增强单核细胞活性和增强单核细胞的抗原递呈功能。王宇学等[3]又用RT-PCR技术检测牛膝多糖诱导单核细胞HLA-DRαmRNA表达水平并且对PCR产物进行测序鉴定，发现牛膝多糖能诱导单核细胞HLA-DRαmRNA表达。在体外，ABPS上调单核细胞HLA-DRαmRNA，有显著的剂量和时间效应关系。提示ABPS能激活单核细胞并有增强单核细胞的免疫功能。 1.2 对巨噬细胞的影响 唐黎明[4]等观察了牛膝