第二章基因工程专题综合.pptVIP

一、基因工程 定义 基因工程就是从生物体中把生物遗传物质分离出来，或人工合成一个DNA分子，用人工的方法对遗传物质进行搭配、组合，然后转入某细胞内，通过改变其遗传物质的结构，来改变它的遗传特性，使之定向地产生符合人类需要的新型生物物种、类型。  一个基因一个性状？不一定。例如肤色的控制至少有三个基因参与。 基因决定性状，环境还起不起作用？在基因型确定的基础上, 环境常常会影响表型。 基因工程技术  将外源基因（又称目的基因，是一段 DNA 片断）组合到载体 DNA 分子中去，再把它转到受体细胞（亦称寄主细胞）中去，使外源基因在寄主细胞中扩增和表达，从而得到期望的由这个外源基因所编码的蛋白质。  ? 获得目的基因 ? 构造重组 DNA 分子 ? 转化或转染 ? 表达 ? 蛋白质产物的分离纯化 基因工程步骤一--获得DNA片段，取得目的基因 PCR —— 把寻找目的基因和扩增目的基因两步操作并成一步  PCR 的三个步骤为一次循环，约需几分钟，每经一次循环，所找到的目的基因扩充一倍，经过 20 次循环，即可扩增 106 倍。 载 体 质粒载体 pBR322 质粒图谱 噬菌体载体 噬 菌 体 噬菌体感染细菌示意图 复合载体 工具酶 要把目的基因“装”到载体中去，需要多种工具酶，其中关键的酶是限制性内切酶。  此酶识别一定碱基序列，有的还可切出“粘性”末端，使得目的基因和载体的连接非常容易。 限制性内切酶 限制性内切酶 基因工程步骤三--将重组的DNA分子引入合适的宿主细胞内 基因工程步骤四—表达筛选 筛 选 方 法 筛 选 方 法  印迹法的关键是“分子杂交”，利用碱基配对的原则，用一段小的已知的 DNA 片断去寻找大的未知的基因片断。 探针 DNA 片断来源 根据目的蛋白的氨基酸序列，只要其中 N－端 15－20 个氨基酸序列，按三联密码转为 40-60 核苷酸序列，人工合成，即为探针 DNA 片断。 筛 选 方 法 基因工程的最后一步，通常是把所获得的蛋白质分离纯化，得到蛋白质产品。 基因工程的应用 基因工程应用示例 （2）用于提高奶酪产量 生产奶酪的凝乳酶传统上来自哺乳小牛的胃。现在可以通过基因工程办法，用酵母生产凝乳酶，大量用于奶酪制造。 （3）转基因动物和植物 转基因动物首先在小鼠获得成功。现在转基因动物技术已用于牛、羊，使得从 牛/羊 奶中可以生产蛋白质药物。称为“乳腺反应器”工程。 转基因植物亦已在大田中广为播种。 ?（4）工程菌在环境工程中应用 美国 GE 公司构造成功具有巨大烃类分解能力的工程菌，并获专利，用于清除石油污染。 用质粒 构建 重组DNA分子 1、转化 某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的现象。 2、转染 除去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程。 3、转导 用噬菌体做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。 4、显微注射 用噬菌体DNA构建 重组DNA分子 从大量携带重组体DNA分子的宿主细胞中分离出携带 目的基因的细胞。 重组 DNA 分子进入寄主细胞后，其中的目的基因能否表达，表达效率高低，还有很大差别。表达通常是指目的基因编码蛋白质的合成。 新基因能否在新细胞中定居下来，能否复制自己稳定传代，能不能产生表达作用，指导蛋白的合成。 1、遗传学方法 对于带有抗药性基因的质粒，可通过检测受体菌是否由敏感状态变成抗药状态进行筛选。 2、核酸杂交法 硝酸纤维 薄膜 与探针 杂交 薄膜 放射 自显影 胶片 选择所 需克隆 印 迹 法 内切酶切开DNA 电泳 印迹转移 放射性探针 杂交 胶片显影 印迹法的主要步骤：（1）基因文库－ DNA 用限制性内切  酶处理。（2）DNA 片断混合物通过电泳分离。（3）电泳后，通过印迹技术转到酯酰  纤维薄膜上，以便操作。（4）用已知小片断DNA 作为探针，  互补结合需要找的基因片断。（5）探针DNA 片断已用放射性元素 标记，使胶片感光后可看出。 3、免疫学方法 用特异性抗体检测基因产物从而筛选阳性克隆的方法。 基因工程步骤五—表达蛋白分离 生产基因工程产品 生物反应器  基因工程技术已经在医学、工业、农业等各个领域得到了广