产纤维素酶菌株选育地研究进展.pdfVIP

《萄函麟泰鼷壁髓萨邈嬷蠛蕊溜甓 产纤维素酶菌株选育的研究进展★ 刘云云“张宇许敬亮“何敏超袁振宏 (中国科学院广州能源研究所，中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室， 广州510640) 摘要：重点介绍了高产纤维素酶菌株选育技术包括诱变育种、原生质体融合技术育种、纤维素酶基 因克隆及分子改造技术的国内外研究现状。利用现代分子生物技术手段对产酶菌株进行遗传改造可 获得所期望的高产及性能稳定的纤维素酶，纤维素酶菌株产酶量少、酶活力低、成本高等问题将得 到很大改进，基因克隆及分子改造等相关技术有待进一步深入研究。 关键词：纤维素酶选育诱变原生质体融合基因克隆分子改造 纤维素的水解是燃料乙醇生产过程中的关键。纤维素酶解法具有无污染、反应条件温和底物专 一等优点。酶法降解纤维素以高效降解纤维素的菌株为基础，现有菌株所产的纤维素酶大部分存在 酶系不完全、酶活不够高等问题，选育高产纤维素酶的优良菌种是开发利用纤维素资源的前提和关 键…。近年来，许多研究者通过分子生物学手段不断提高酶活力和获得新性能的重组纤维素酶。本 文就近期国内外诱变育种、原生质体融合、基因克隆和分子改造等分子生物学技术在产纤维素酶菌 种改造方面的研究现状作以论述，供相关研究者参考。 1．纤维素酶及其生产菌 1．1纤维素酶概述 纤维素酶(cellulase)是一种高活性的生物催化剂，是能降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称。 一个完整的酶系主要由3类酶组成：内切葡聚糖酶(CMC)酶，来自真菌的简称EG，来自细菌的 简称Cx酶，作用于纤维素分子内的非结晶区；外切葡聚糖酶，来自真菌的简称CBH，来自细菌的 简称为c1酶，主要作用于纤维素线状分子的末端，水解届一1,4一糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子； 口一葡萄糖苷酶(也称BG或纤维二糖酶)，它的作用是水解纤维二糖及低分子量的纤维寡糖最终生 产葡萄糖【2】。 能够降解无定形纤维素和结晶纤维素的酶系称为完全酶系，仅能降解无定形纤维素的酶系称为 不完全酶系。 1．2纤维素酶的生产菌 微生物是纤维素酶的最主要来源，包括细菌、真菌和放线菌等，不同种类的微生物形成的纤维素 酶系在组分和性质上有很大差异。目前用于工业化生产纤维素酶的微生物大多属于真菌，研究较多的 然气水合物重点实验室开放基金(0907k6、y207jb)。 士，副研究员，硕士生导师，主要从事燃料乙醇的研究工作。Email．．xjl@ms．giec．ac．ca。 62 r— l会议文集一一o ———_-。～ 露燕匿壁凌萨亟搬瑟蕊涸爨《鲼蚴 产纤维素酶、性状稳定和较好的“抗代谢阻遏”能力，被认为是最有工业应用价值的菌株。另外，绿 色木霉(Trichoderma viride)和黑曲霉(Aspergillusniger)、康氏木霉(Trichodermakoningii)也是目前较 好的纤维素酶生产菌【3】。应用最多的木霉属虽然产酶量大，但其纤维素酶比活力较低，届．葡萄糖苷酶 的比例偏低，其活性也较小，进一步筛选纤维素酶高产菌株是实现其工业化应用的关键。 2．纤维素酶高产菌株选育 从自然界中直接分离筛选出来的野生型纤维素酶生产菌株其产酶性能一般较低，需要对菌株进 行分子育种，以获得高性能的菌株。常用的分子育种方法主要有诱变选育、原生质体融合技术、基 因工程改造高效产酶菌株等。 2．1诱变选育 诱变育种是用物理和化学等因素使产酶菌株细胞内的遗传物质发生变化，引起突变，并通过筛 选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。对纤维素酶产生菌进行诱变是提高产酶量的一种简单 有效的方法，能够大幅度改变菌种的遗传特性，从而获得高产突变菌株。 诱变育种的基本步骤包括：出发菌株的选择，诱变菌株的培养，诱变菌悬液的制备，诱变处理， 后培养，突变株的分离与筛选等。常用的诱变剂有紫外线(UV)、60Co吖射线、甲基磺酸乙酯(EMS)、 于纤维素酶作用的终产物葡萄糖会阻遏酶的进一步合成，这被认为是天然菌株纤维素酶产量低的一 个主要原因。因此，除传统的依据水解圈大小鉴别正向突变株的方法外，还可以通过筛选抗阻遏突 变株的方法来获得高产纤维素酶菌株【5J。 方