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禽的传染病 与病毒的毒力有关，几乎所有超强毒株或强毒株都具有保守的 SWSASGS 序列，其 4 个丝氨酸残基暴 露在 VP2 蛋白外部，能与细胞膜形成分子间氢键，可能参与了病毒的黏附和成熟过程，而弱毒疫苗株 却有所变异，其中的丝氨酸被占较大空间的氨基酸（R ）取代，阻止了分子间的作用，干扰了病毒的 ［ ］ 毒力 16 。目前，通过一些特征性氨基酸可以区分不同的毒株，超强毒株在第 222 位均为 A ，而其它 毒株为 P 、T 或 Q ；第 256 位超强毒均为 I ，其它毒株为V 或 A ；第 294 和第 299 位，超强毒株分别 为 I 和 S，其它毒株多为 L 和 N 。多数的弱毒株在第222 位为 P ，第 253 位为 H ，第 279 位为 N ，第 284 位为 T ，并且在七肽区为 SWSARGS，变异毒株在第222 位氨基酸 T 或 Q ，第249 位为 K ，第25 4 位为 S。 IBDV SX/12 VP2 基因高变区除 222S 外其他主要氨基酸均符合超强毒株特征，即 249Q 、254G 、 256 I 、279D、284A 、294I 、299S ，SWSASGS 七肽区不变。第 222 位氨基酸为 S，虽与典型超强毒株 A 和经典弱毒株 P 及变异株 T 或 Q 均不同，但与分离于 1990 年的巴西经典强毒株 Prezotto-BR 以及 波兰分离株 80/GA 相同[17] ，因此，从分子水平上判定 IBDV SX/12 株仍属超强毒株的范畴，对 VP2 进化树分析结果也显示该毒株与各超强毒株属同一进化分支。但 222A-S 的改变是否提示该毒株毒力 较典型超强毒株 HK46 、OKYM 等略有减弱，有待于进一步验证。 虽然我国长期以来一直采用疫苗预防为主的综合性防治措施，但由于超强毒株和变异毒株的出现， 使得免疫失败屡屡出现，给 IBD 的防治带来了巨大困难。因此本研究通过对IBDV SX/12 分子水平鉴 定以期为相关疫苗的研制以及山西地区传染性法氏囊病的防治提供有益参考。 参考文献（略）  gga-miR-21 过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响 1 1,3 1* 2 1 1 2* 欧阳伟 ，朱向东 ，王永山 ，王永强 ，潘群兴 ，毕振威 ，王笑梅 （1. 江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中 心，江苏南京，210014 ；2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨， 150001；3. 南京农业大学动物医学院，江苏南京，210095 ） 摘 要 为研究 microRNA （gga-miR-21）对传染性法氏囊病病毒（IBDV ）复制的影响，本研究利用PCR 方法从鸡的 肝细胞基因组中扩增细胞 pri-gga-miR-21 ，克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP 中构建重组质粒pL-miR-21 。将pL-miR-21 和 3 个包装质粒 pLP1 、pLP2 和 pLP/VSVG 共转染 293FT 细胞，制备含 gga-miR-21 基因的重组慢病毒 VL+miR-21 。 用 VL+miR-21 感染 DF-1 细胞，经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达 gga-miR-21 的细胞株 DF-miR-21 ，用定量 RT-PCR （qRT-PCR）检测表明，gga-miR-21 的表达量比正常 DF-1 细胞提高 60% 。将IBDV 接种于 DF-miR-21 细胞，在 96 h 后，其病毒滴度（104.75TCID50/0.1mL）显著低于正常DF-1 细胞的病毒滴度（108.75TCID50/0.1mL）。用生物信息学 方法和双荧光素酶报告系统分析验证，在 IBDV 基因组 VP1 基因中存在 gga-miR-21 的结合靶点。将 IBDV 感染的 DF- miR-21 细胞，用western blot 分析，VP1 蛋白的表达量比正常 DF-1 细胞显著降低；用 qRT-PCR 分析，VP1