生姜蛋白酶的部分纯化和酶学性质研究.pdfVIP

维普资讯 第 8卷 第 3期 天 津 农 学 院 学 报 VO1．8．No 3 2001年 9月 JournalofTianjinAgricuhura[College September．2OO1 文■埔号 ：1008—5394(2001){13 OOl9 ∞ 生姜蛋 白酶的部分纯化及酶学性质研究。 张平平 ，卢绍娟 ，刘宪华 (1天津农学 院．天律 300384；z甫开太学 ，天津 300071) 摘 要 ：对姜块 中的生姜蛋白酶进行郭分纯化 ，井对其主要酶学性质进行 了研究。 酷蛋白 为底物 时 ，其最适 pH 值 为 6．0，晟适温度 为 60C，3OC下保温 30rain，酶活力不变 ，高于 72C酶活力迅速 下 降，60C、75c、80C时 ，该酶 的半衰期分别为 I7、l2和3min．K 值 为 0．270mmoI／L；二琉 苏糖 醇 (DTT)、己二胺 四己酸二钠 (EDTA)对 酶有澉活作用}对 氯汞苯 甲 酸 (PCMB)，氯化锌 、硫酸铜等对 酶有抻制作用 {氯化钙 硫酸镁、三 氯化铝对酶活髟 响不大 。 关 量 词 ：生姜 蛋 白酶 ·部分纯化 ；酶学性质 中圈分类号 ：Q556．9 文献标识码 ：A 生姜蛋 白酶是有待开发利用 的新的植物 蛋 白酶．可用 于肉类嫩化 、姜汁凝乳 、蛋 白质水解等方面。 1973年Thomson等人从姜报茎 中提取 了该酶．并命名为Zingibain口]，认为生姜蛋 白酶是蛋 白永解酶的 一 种新来源。日本、德 国等国家对生姜蛋 白酶的提取、纯化、性质进行 了较多的报道．Hashimoto，akihiko 等人 认为该酶分子量为 3o000，有胶原蛋 白酶和蛋 白酶活性 。国内在这方面的研究还很少 。赵帜平等 人用苯酚硫酸法鉴定证实 ，生姜蛋 白酶的化学率质是一种糖蛋 白 ]。 本研究以莱芜大姜为原料，对姜块 中的生姜蛋 白酶进行提取 、部分纯化，并 以酪蛋 白为底物，对其 主 要酶学性质进行了研究 ，以期对应用方面有所帮助。 1 材料与方法 1，1 优质莱芜大羹(一20C下冷藏 ) 1．2 实验方法 1，2，1 生姜 中蛋 白质 、蛋 白酶活力 的测定 (1)蛋 白质含量的铡定采用考马斯亮蓝法 “ 吸取提取液 0．1mI，放人具塞试管中，加人 5mI考马斯亮蓝混台，放置 2min，在 595nm处 比色。 (2)生姜蛋 白酶活力测定 生姜蛋 白酶活力 IU：1rain内分解出1 g酪氨酸的酶量。酪氨酸标准曲线的制作 ：见参考文献4和 5。 生姜蛋 白酶活力的测定步骤 蛋 白酶 |瘦(含有 0．1mo{／I，pH 6．0的磷酸缓 冲液和 1mmol／1 DTT)10mI与 1．0ml1．5 的酪氨酸混合．40C水浴下保温反应 10rain．加人 2．0ml60 的三氯 乙酸终止反应．水浴中再放 10mn后．过滤反应液．取 1．0ml滤液与 50ml0．4mol／l碳酸钠溶液和 10mIFlion一酚试剂混合 ，0(、下静置发色 20min．在 660nm处 ．以空 白值 (不加酶液，加 1．0ml蒸 馏水 ，其余 同)为参比测吸光度。 蛋 白酶活力 的计算 ：蛋 白酶活力单位 U【)一()．n ×K×N 式 中：K… 1O0除以酪氨酸标准 曲线 1 ’【Vg／FI3【对啦 f1．D 情 ．N——酶液稀释倍数 ， 收■ 日期 20JII j}¨ !! 作者简介 强 {1。，7(J ． L帅 硕 I．1世 ¨JI仃IIIIII 鞋 。} I¨ 维普资讯 天 津 农 学 院 学 报