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基于分子探针的生物医学研究 王桐傲+ (湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室，湖南省生物纳米工程技术 研究中心，湖南大学生物医学工程中心，长沙，410082) 在分子水平上开展生物学的研究是当前生命科学研究的重点和热点，其主要研究内 容是在分子水平上研究核酸与核酸、核酸与蛋白质之间的相互作用。分子探针是快速、 灵敏、实时获得这些信息的重要手段，目前常用的分子探针有两种：一种是Kramer等首 次设计并合成的分子信标核酸探针，它所具有的特殊发夹结构使之具有高度的特异性， 能检测目标链中的单碱基突变。美国Florida大学的Tan等利用分子信标制成了世界上最 小的DNA分子马达，该文在{Nano Lett))上发表后引起普遍关注，((Nature))特地为此 发表了一篇评论文章。另一种核酸探针是能与蛋白质等配体专一、高效结合的Aptamer 探针：利用Aptamer对靶分子的高识别能力和强亲和力，结合现有的核酸探针技术，已 发展出灵敏、特异性的蛋白质探针。以下简要介绍一下这两种探钟的研究进展。 1、分子信标用于活细胞内mRNA的监测。1998年，美国宾西法尼亚大学的 的特定mRNA成像，掀起了利用分子信标研究细胞内mRNA成像的热潮。Emory医学院 的Bao等针对k-ras基因和survine基因，利用双分子信标发生荧光能量转移消除干扰的 方式，实现了在活细胞水平上对mRNA的测定。他们还将生物素标记到分子信标上，通 过键合亲和素，可以阻止探针进入细胞核内，也实现了对活细胞内mRNA的成像。几乎 是同时，美国国家卫生研究所的T．Sanjay在《JBiophys))也发表了类似的工作，不过研 究对象是鸡胚成纤维细胞。我们也针对肿瘤相关基因设计了分子信标探针，实现了对这 些基因转录产物的快速、灵敏测定，这些工作对研究活细胞内基因的表达过程非常重要。 2、分子信标用于核酸与蛋白质之问的相互作用研究。我们利用分子信标发展了核 酸片段检测技术平台(NTFS)，开展了一系列核酸一蛋白质棚互作用的研究工作。如核 酸的连接、磷酸化、酶切以及甲基化过程的实时监测。我们关于监测核酸连接过程的工 接受。此外，我们设计了新的双发夹分子信标，可以快速、准确分析甲基化酶的活性并 可筛选抗癌药物。利用连接酶发展的新的检测单碱基突变的技术也已完成，主要是以突 变型基因的表达为模版，利用荧光能量转移的原理实现对肿瘤基因单碱基突变的检测。 cn 通讯联系人：王柯敏，Email：kmwang@hnu 12 利用DNA聚合酶的方法研究DNA复制过程也是一项很有意义的工作，有望对DNA连 续复制和不连续复制两种不同的复制方式进行实时监测。 3、AIcItamer探针用于蛋白质组学的研究：利用Aptamer己发展了多种灵敏、特异性 Biotechno))上发表论文，针对血小板源生 的蛋白质探针。Freddksson等2002年在(Nat 长因子设计了Aptamer探针，结合连接酶的手段用TaqMan探针实时荧光PCR法实现了 荧光基团和熄灭基团构成了一个新型的对蛋白质有特异性作用的MBA荧光探针，并用于 蛋白质的相互作用研究。随后，他们还发展了基于荧光信号变化的PDGF探针，基于此 结合抗体与Aptamer之间的竞争反应，发展了一种新的研究蛋白质之间相互作用的方法。 有开关结构的三片段DNA探针，可用于蛋白质的测定，而检测的选择性就基于Aptamer 的识别机理。 4、Aptamer探针用于疾病的诊断和治疗。由于Aptamer具有和抗体一样的结合特性， 所以从理论上来说，利用抗体作为蛋白质检测、疾病诊断的方法都可以用Aptalner来代 替。已有学者将Aptamer连接上酶分子，利用Aptamer与目标蛋白的特异结合产生导向 Lead上介绍了VEGF、PDGF 作用，提高酶分子活性以增加疗效。意大利学者在(《FEBS Biotechno》上连续发表Duke大学的文章，讲述合理 用于肿瘤的治疗。2004年的(Nat Acid 年的_{(NuclRes}上发_寝论文，用放射性同位素标记的Aptamer实