三种贝类原虫多重荧光定量PCR方法建立.pdfVIP

三种贝类原虫多重荧光定量PCR方法的建立 谢芝勋 谢丽基 庞耀珊 刘加波 邓显文 谢志勤 (作者单位：530001，南宁广西兽医研究所) 【摘要】目的建立能够同时检测单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫的i重荧光定量PCR方法。方法根据基因 库中单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫基冈序列。设计了三对特异性引物和三条用不同荧光基团标记的TaqMan 探针。对反应条件和试剂浓度进行优化，建立了能够同时检测单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫的三重荧光定量 PCR方法。结果该方法对单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫的检测敏感性分别达到40、400和40个模板拷贝数； 此外抗十扰能力强，对单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫不问模板浓度进行组合，仍可有效地同时检测这三个原 虫，对嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶Ilf【弧菌、溶藻弧菌、河弧菌和拟态弧菌等病原体的检测，结果全为阴性。 结论研究建立的单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫多重荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量和重复性好 等优点，可用于l临床上单孢子虫、派琴虫病和折光马尔太虫感染的检测。 【关键词】单孢子虫；派琴虫；折光马尔太虫；三重荧光定量PCR ofa Real—timePCR fordetectionofthreeProtozoansin DevelopmentMultiplex assay shellfishXIEZhi-xun,xlE Xian-well．XIE Research Li-ji．PANGYao-shan．LIUJia-bo．DENGZhi—qm．CruangxiVeterinary 530001，China Institute,Nanning To a real—timePCR forthe detectionof [Abstract]Obiective assay sp。 developmultiplex rapid Haplosporidium andMarteilia to of and Perkinsus the sp refringens．MethodsAccordingsequencesHaplosporidiumsp，Perkinsussp Marteilia setsof withthree foreach refringens，threespecificoligonucleotideprimers，alongTaqManprobesspecific were reaction suchastheconcentrationofthreeof protozoanparasitedesigned．Thepammeters pairprimers，threeTaqMan andthereactionbufrerwere to a real．timePCR The of probes optimizeddevelopmultiplex assay．Resultssensitivity 40 andMarteilia real．timePCR was40。400and for multiplex assay templatecopiesHaplosporidiumsp，Perkinsussp