细胞外信号调节激酶1／2信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管平滑肌细胞迁移功能变化中调控作用.pdfVIP

维普资讯 生理学报ActaPhysiologicaSinica，February25，2007，59(1)：94—102 http：／／www．actaps．com．cn 细胞外信号调节激酶 1／2信号通路在慢性哮喘模型大鼠支气管 平滑肌细胞迁移功能变化中的调控作用 谢 敏，刘先胜 ，徐永健，张珍祥，白晶，倪 望，陈士新 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科，武汉430030 摘 要：本研究旨在探讨细胞外信号调节激酶 l，2(extracellularsigna1．regulatedkinase，ERK1／2)信号通路在慢性哮喘模型大鼠 支气管平滑肌细胞(bronchialsmoothmusclecells，BSMCs)迁移能力改变中的调控作用。应用卵清蛋 白致敏和雾化方法制备大 鼠慢性哮喘模型，体外培养大鼠BSMCs，采用免疫荧光细胞化学、Westernblot和RT．PCR方法检测ERK1／2信号通路的 表达，分别用平面迁移实验和跨膜迁移实验来评价BSMCs的活动和趋向迁移能力，并比较用和不用ERK1／2信号通路干预 剂的差异。Westernblot结果显示慢性哮喘模型大鼠BSMCs中总ERK1／2(9．13+0．87)较对照组(4．68~0．59)明显增加，磷酸 化ERK1／2(P—ERK1／2)占总ERK1／2的比值(0．55~0．05)较对照组(0．48~0．04)显著提高 (n=10，P0．01)。慢性哮喘组ERK1和 ERK2mRNA 的表达(1．83~0．24和 1．07~0．11)较对照组(0．58~0．14和0．51~0．12)明显增高(n=lO，P0．01)。在平面迁移实验中， 慢性哮喘大 鼠BSMCs的迁移最远距离是对照组的(2．9~0．1)倍，在 ERK1／2激动剂表皮生长因子(epidermalgrowthfactor， EGF)~I]激下增加到(5．0~0．2)倍，而在 30~tmol／LPD98059的作用后下降到(1．7~0．2)倍。正常对照大 鼠BSMCs平面迁移能力 对 PD98059的反应较慢性哮喘组弱，仅在 l00p．mol／LPD98059的作用下下降到(0．8~0．1)倍。跨膜迁移实验中，慢性哮喘 大鼠BSMCs的跨膜迁移细胞是对照组的(1．9~0．1)倍，在EGF刺激下增加到(3．1~0．2)倍，而在 30~tmol／LPD98059作用后下 降到(1．45~0．2)倍。这些结果表明慢性哮喘模型大鼠BSMCs的迁移能力明显增强，ERK1／2信号通路在该功能变化的调控中 可能发挥 了重要作用。 关键 词：细胞外信 号调节激酶 ；哮喘；支气 管平滑肌细胞 ；迁移 中图分类号 ：R329 Roleofextracellularsignal-regulatedkinase1／2signalingpathwayinmigration ofbronchialsmoothmusclecellsofchronicasthmaticrats XIEMin，LIU Xian—Sheng，XU Yong—Jian，ZHANGZhen—XiangBAIJing，NIW ang，CHEN Shi—Xin ， DepartmentofRespiraotryMedicine，TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceand Technology,Wuhan430030,China Abstract：Thisworkwasdesignedtoexplorehteroleofextracellularsingal-regulatedkinase1／2(ERK1／2)singalingpahtwayinmigration ofbronchialsmoohtmusclecells(BSMCs)ofchronicasthmaticr