Ni2+离子修饰的金纳米粒子对牛血红蛋白的选择性吸附.pdfVIP

第35卷第2期　 东 北 电 力 大 学 学 报 Vol.35,No.2 2015年4 月 Journal Of Northeast Dianli University Apr. ,2015 - - - 文章编号:1005 2992(2015)02 0057 04 2+ Ni 离子修饰的金纳米粒子对牛血红蛋白 的选择性吸附 付　 娆,程　 欣 (东北电力大学 化学工程学院,吉林 吉林 132012) - 摘　 　 　 要:利用固定金属离子亲和色谱法即IMAC (ImmobilizedMetal ionaffinity chromatography)的原 2+ 理,使用表面修饰Ni 离子的金纳米粒子对牛血红蛋白的吸附和脱附行为进行了研究。 粒子对牛血红 蛋白的最大吸附量可达到5.56mg/ mg。 粒子可以将牛血红蛋白从牛血红蛋白和牛血清蛋白混合物中分 离出来。 通过紫外光谱及电泳测试进一步论证了前面的结论。 这种方法简单、有效、方便,在牛血红蛋 白的分离纯化方面有着很好的应用前景。 关 键 词:蛋白;吸附;脱附;配位;金纳米粒子 - 中图分类号:O6 6　 　 　 　 文献标识码:A [1] 金纳米粒子表面吸附蛋白在许多领域,特别是生物纳米技术领域得到了广泛的应用 。 蛋白的纯 化是研究其功能和结构或者其潜在应用的先决条件。 各种色谱分析方法由于其高的解析能力成为蛋白 [2] 纯化中占主导地位的方法 。 在各种色谱技术中,蛋白的分离主要依靠它们的生物和物理化学性质、 [3] 分子尺寸、净电荷、生物特异性和疏水性 。 由Porath首次提出的IMAC法是目前最有效的蛋白吸附方 [4] 法 。 其原理是基于蛋白质的组氨酸咪唑基、色氨酸的吲哚基和半胱氨酸的巯基能与铜、锌、镍离子之 间形成稳定的螯合物而进行分离的。 与传统的生物亲和配体相比,使用金属离子更加经济、规模更小、 性质稳定,吸附效率也因此而提高。 但是这种分离操作的方法繁琐、需时较长、效率低、操作过程中损失 较大。 因此,需要引入一个新的基质使蛋白质的分离和纯化变得简单和经济。 血红蛋白是血液的重要 - 组成成分,可以与许多种类的内源性和外源性配体结合,其组氨酸残基含量丰富,是一种很好的His tag [5] 模型蛋白 。 2+ 本文以谷胱甘肽为配体将Ni 离子修饰到金纳米粒子的表面,利用这种粒子可以将牛血红蛋白从 牛血红蛋白和牛血清白蛋白的混合物中分离出来,这种粒子可以为纯化血红蛋白提供一种简单、方便、 高效的方法。 1　 材料与方法 1.1　 试剂与仪器 - 牛血红蛋白,牛血清白蛋白,谷胱甘肽,氯金酸,柠檬酸钠,硫酸镍,氯化钠购于Sigma Aldrich公司。 - 丙烯酰胺(AR),十二烷基磺酸钠(AR),过硫酸铵(AR)Tris(AR),甘氨酸(AR),