测定牛血清白蛋白的高灵敏显色反应体系--BSA-BAS-甲醇-吐温-80.pdfVIP

第十雇全离有帆分析学术研讨会 测定牛血清白蛋白的高灵敏显色反应体系 ·——。墅A—BA}甲醇一吐温：鲤 庄惠生 段建平 王琼娥 陈国南 黄金陵 (福州大学化学系，福州3Y-沁002) 关键词显色反应牛血清白蛋自铬天青s 囊裹本文研究了在甲醇和吐温存在下，以铬天青s作为生色剂；使其与牛血清白蛋白作用， 建立了测定牛血清白蛋白的高灵敏显色反应体系BSA-BAS-甲醇一吐温-80，涓定BsA的线性范围为 7 X 0～4．5 mol／L 10‘。哟l／L’测定1．8×10BsA溶液10次，求得相对标准偏差为0．52‰检测 X 限为1．6510‘’哟l几BS气比文献的灵敏度高一个数量级。 蛋白质与某些生色剂，如与溴甲酚绿川、溴酚兰馏’、铬天青SHl在酸性条件下发生作}lj导 致颜色的变化，以此类生色剂作为传感媒介的分析方法，己广泛应用予蛋白质的临床分析。 由于一般蛋白质具有与阴离子染料结合的性质，被结合的是蛋白质的碱性氨基酸残基，而白 蛋白以外的蛋白质缺乏这种性质，因此，大多数染料结合法被用于自蛋白的测定。文献曾报 X—100等表面活性 道在溴甲酚绿．溴酚兰等测定蛋白质的酚试剂中，加入吐温一80，Triton 剂，试图提高测定灵敏度，但未能实现，因为表面活性剂的加入，显色体系中产生难溶性沉 淀物。本文以铬天青S作为生色剂，加入甲醇和表面活性剂吐温-80的混合溶液，体系中不 会产生难溶性沉淀，而且提高了方法的灵敏度，检测限为1．65×10。9Jol／L，比文献幅‘高一 个数量级。 1实验部分 1．1仪器与试剂 721型分光光度计(厦门分析仪器厂)。牛血清白蛋白(简称陷A，中国科学院上海生 试剂采购供应站)，Triton 称C1lIAB，北京海淀区新星试剂厂)，甲醇(AR，福州市化工研究所)。 1．2实验方法 ml 依次移取一定体积的BsA溶液，BAs溶液，缓冲溶液，甲醇．表面活性剂溶液于25 min后，移到2 容量瓶中，加蒸馏水定容，静置45 CM比色皿中，以蒸馏水或试剂空白为参 比，测其吸光度。 2结果与讨论 2．，髓^-卧S噩色反应体系 在pIl为2．80的柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲溶液中，BAS的最大吸收波长为483舳， 菸^一B^S复合物的最大吸收波长为540nm’对比度为57叫。8As在540舳处几乎无吸收， 因此测定路A的背景值很小，故选择测定波长为540珊。 D49 渣}’届伞困有机分析学术研讨会 吸光度达峰值，|i变化较小，pH人丁．3．0，吸光度明显卜．降，所以显色体系pH选择2．80，缓 冲溶液用量为5ml。 ml。 显色剂BAS浓度选厢2．8×i0’mol／L，用量选择2．5 2．2 BSA-BAS-I甲醇显色反应体系 ml，其它 甲醇的加入，使BSA与BAS之间的显色反应灵敏度提高，选择甲醇用量为0．5 显色反应条件与BSA-H．AS显色体系相同。 2．3 BSA-BAS-表面活性剂显色反应体系 试验了十夕、i烷基三甲基溴化铵，吐温～80，TritonX—100对显色反应的影响，结果表明， ml1％吐温一80。 吐温-80的增敏效果较佳，显色反应体系中加入0．2 2．4 BSA_BAS一甲醇一吐温-80显色反应体系 甲醇和吐温-80分别