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CMIC：对基因治疗方法操作步骤的探究 【CMIC讯】伴随生物技术的发展，基因治疗作为一种可根治对人类健康产生重大威胁的疾病的有效手段，在生命科学领域正扮演着越来越重要的角色。 一般而言，基因治疗的程序主要分为六步，按顺序包括治疗性目的基因的选择和获取——基因载体的选择——靶细胞的选择——基因转移方法的选择——转导细胞的选择鉴定——回输体内。 1、治疗性目的基因的选择和获取。应用基因治疗的前提就是要对造成疾病的基因及其产物有详尽的了解，完全掌握致病基因的排序方式，这样才能利用克隆等方式获取目的基因。 2、基因载体的选择。基因载体指的是将目的基因能导入宿主细胞的工具，主要分为病毒载体和非病毒载体两大类。因转移效率较高，病毒载体成为现阶段使用最多的基因治疗载体。据统计，目前约有72%的临床试验计划和71%的病例采用了病毒载体，其中逆转录病毒载体使用最为频繁。不可否认的是，病毒载体也存在一些难以解决的缺陷，如细胞毒性、致免疫性、致变异性和缺乏靶细胞定位等。因而，为解决病毒载体的缺点，非病毒载体的研究正在稳步进行，即通过物理、化学合成方式将目的基因导入细胞中。相比病毒载体，非病毒载体安全性更高，但是转染效率低、靶向困难等问题的存在，还需相关学科和领域共同努力、深入研究，使非病毒载体的基因治疗能取得突破性的进展。 3、靶细胞的选择。分为体细胞和生殖细胞两大类。由于涉及遗传和伦理学等问题，生殖细胞目前被禁止使用于基因治疗。常用的体细胞包括造血干细胞、皮肤成纤维细胞、肝细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、肌肉细胞和肿瘤细胞等。靶细胞的选择要求其容易取出和移植，且具有较长的活性寿命，易于被外源基因转染，回输体内后容易成活等。 4、基因转移方法的选择。根据基因载体的不同，基因转移方法也分为病毒介导的基因转移系统和非病毒介导的基因转系系统两类。病毒基因转移法的基本过程是将目的基因重组到病毒的基因组中，利用病毒的易感染性感染靶细胞，最终实现基因治疗的目的。非病毒基因转移法即通过直接注射体内、物理方法（电脉冲介导法、显微镜注射法、脂质体法）或化学方法（DNA-阳离子-二甲基亚砜法、颗粒轰击技术等）将目的基因直接转移至靶细胞内，再使之进行稳定的表达。 5、转导细胞的选择鉴定。由于不论那种基因转移方法都不能使目的基因百分之百的转染到细胞内，因而需要对培养出的细胞群进行鉴别和筛选。常用的筛选技术包括根据重组载体的标志作筛选、核酸杂交法、PCR法、免疫学方法、DNA限制性内切酶图谱分析和核苷酸序列测定。 6、回输体内。即将筛选出的有效且能稳定进行表达的载体或受体细胞输回患者体内，观察疗效，达到基因根治相关疾病的目的。 来源：中国市场情报中心（CMIC） /