dd第四次实验血钙血磷测定.pptVIP

一、血清钙离子测定 甲基麝香草酚蓝比色法 邻甲酚酞络合酮法（临检中心推荐） 原子吸收光谱法 离子选择电极法 (一)实验原理 血清中钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚蓝染料结合，生成有色复合物。 (二)试剂 (三)操作 1. 检测参数 主波长：612nm 温度： 室温。 2.　空白管 标准管 样本管 3.分别混匀各管，室温放5分钟，　以空白管校零，记录各管吸光度。 4.结果 钙 (mmol/L)= (四)临床意义 1.参考值： 2.1—2.9mmol/L。 生命危急值：1.7mmol/L，3.3mmol/L。 2.增高：甲旁亢、多发性骨髓瘤、VitD增多症、代酸等 3.降低：甲旁减、尿毒症、佝偻病等。 (五) 方法评价 1.重复性、准确度较好、简便、易于自动化。 2.线性：在样本浓度0-3.75mmol/L范围内, 线性良好。 3.精密度：批内 CV≤5％。批间相对误差≤5 4.易受干扰。 三、无机磷的测定 磷钼酸还原法　　　　临检中心推荐 染料结合法 氧化酶法 同位素质谱法　　　　决定性方法 原子吸收光谱法　　 (一)实验原理： 　　血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成在340nm处有吸收峰的磷钼酸铵，其吸光度的变化与无机磷含量成正比。 (二)试剂 (三)测定步骤 　 混匀，以37℃10’在340nm波长处比色。 结果 无机磷含量=A样本/A校准×C校准 (四)临床意义 1.参考值：成人：0.97-1.62mmol/L 　　　　 儿童：1.45-2.10mmol/L 2.增高：甲旁减、慢性肾炎晚期、多发性骨 　　　　髓瘤、骨折愈合期等。 3.减低：甲旁亢、肾小管变性病变时等。 (五) 方法性能 精密度:批内变异 CV≤5％。 线性范围:　0-4mmol/L。 三、试剂空白测定 1.定义：用蒸馏水调零测定仅仅未加样品的试剂管，用以扣除试剂干扰对结果所造成的系统误差。 本次实验用钙离子测定的方法进行试剂空白实验。 2.操作 计算 空白值=空白OD/标准OD ×标准浓度 样本值= ×标准浓度 3. 试剂空白的选择原则 （1）试剂中某组分在测定波长下对光有吸收；　　 （2）被测试样本身在测定波长下没有光吸收； （3）被测试样中的其他成分与显色剂作用后在测定波长下没有光吸收； （4）利用改变加入试剂的次序使试样不显色。 　　预习下次课内容：总蛋白测定及回收试验。 遵义医学院 临床生化实验PowerrPoingt Email: ranchongming@163.com 第四次实验 钙、磷、试剂空白测定 目的与要求 1.掌握钙、磷的测定原理和操作方法 2.掌握试剂空白测定的应用 3.了解钙、磷的测定的临床意义 显色试剂 碱性试剂 标准液 MTB 8-羟基喹啉 乙醇胺 碳酸钙 2.50 mmol/L 工作液：显色试剂与碱性试剂等量混合 工作液2.0ml 去离子水 20ul） 工作液2.0ml 工作液2.0ml 钙标准液20ul 血20ul 样本管吸光度 标准管吸光度 × 标准液浓度 磷试剂 硫酸 220mmol/L 钼酸铵 1.0mmol/L 表面活性剂 适量 校准液： 磷酸二氢钾 1.29mmol/L 防腐剂 适量 空白管 校准管 标本管 磷试剂 纯化水 校准液 标 本 (ml) 1.0 1.0 1.0 0.02 0.02 0.02 0.02ml ----- ----- 标本 ----- ----- 0.02ml 蒸馏水 ----- 0.02ml ----- 标准液 2.0ml 2.0ml 2.0ml 工作液 测定管 标准管 试剂空白 室温放5分钟，以蒸馏水调零，612nm 测定。 样本OD-空白OD 标准OD-空白OD